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CTLA4-Ig 和抗 CD40L 单抗对实验性自身免疫性心肌炎的影响硕士研究生：张丽华 硕士生导师：陈敏 教授沈晓丽 教授中 文 摘 要目的：研究 CTLA4-Ig 和抗 CD40L 单抗早期干预对 T 细胞活化的作用，探讨阻断 CD28-B7、CD40-CD40L 共刺激信号通路对自身免疫性心肌炎发生发展的影响及 其机制。方法：60 只 Balb/C 雄性小鼠随机分成两组：（1）实验组 50 只；于实验第 1、8 天 给予皮下注射猪心肌肌球蛋白和 CFA 混合乳化液诱导制备 EAM 动物模型，并进 一步分 5 个亚组：EAM 对照组、CTLA4-Ig 组、抗 CD40L 单抗组、联合干预组 及 IgG 对照组，每组 10 只。CTLA4-Ig 组、抗 CD40L 单抗组分别于初次免疫的 第 1、2、3 天按 1mg/kg 体重小鼠尾静脉注射 CTLA4-Ig、抗 CD40L 单抗，联合 干预组等量注射两者混合液，IgG 对照组注射等量的小鼠 IgG。（2）正常对照组 10 只；用 PBS 代替猪心肌肌球蛋白皮下注射。实验第 21d 眼球采血后留取心脏 标本，HE 染色观察心肌组织病理变化，血清 Tn-I、CK-MB 检测反映心肌损伤 情况，免疫组化及 RQ-PCR 检测心肌 CTLA4、CD40L 及其 mRNA 的表达，RQ- PCR 法检测心肌细胞因子 IFN-γ及 IL-4 mRNA 表达变化，ELISA 方法检测血清 IFN-γ、IL-4 水平。结果：1．动物生存情况 正常对照组皮下免疫过程中死亡 1 只，其余小鼠全部存 活。EAM 对照组与 IgG 对照组小鼠体重生长缓慢，2-3W 时甚至出现下降，其他 各亚组体重无明显差异。2．心肌组织病理改变正常小鼠心肌细胞排列整齐，未见炎症细胞浸润。EAM 对照组与 IgG 对照组小鼠组呈急性心肌炎表现，心肌组织广泛炎症细胞浸润，心肌细胞肥大变性，肌浆溶解断裂，炎症积分明显高于正常对照组（P0.01）。免疫干预后小鼠心肌炎症浸润明显好转，炎症积分降低，CTLA4-Ig 组、抗 CD40L 单抗组见灶性、局限性炎症细胞浸润，联合干预组仅见散在单个核细胞浸润，心 肌炎症积分低于单一干预组（P0.05），两单一干预组间无明显差异（P0.05）。 3．血清心肌损伤标志物检测EAM 对照组与 IgG 对照组小鼠血清 Tn-I、 CK-MB 水平显著高于正常对照组（P0.01）。免疫干预后，血清 Tn-I、CK-MB 水平下降，联合干预组较单一干预组下降更为显著（P0.05），两单一干预组间无明显差异（P0.05）。4．心肌组织 CTLA4、CD40L 及其 mRNA 表达 免疫组化显示 EAM 对照 组及 IgG 对照组心肌广泛浸润的单个核细胞胞膜高表达 CTLA4、CD40L， RQ-PCR 反映其 mRNA 也显著升高，与正常对照组相比，差异有统计学意义（P0.01）。免疫干预后，CTLA4、CD40L 蛋白及 mRNA 水平均下降，联合干预 组较单一干预组下降更为显著（P0.05），两单一干预组间无明显差异（P0.05）， CTLA4、CD40L 在心肌中的表达强度与炎症积分呈正相关。5．心肌细胞因子 IFN-γ、IL-4 mRNA 表达 EAM 对照组及 IgG 对照组小 鼠，心肌 IFN-γmRNA、IL-4 mRNA 表达较正常对照组均明显升高(P0.01)，以 Th1 细胞因子 IFN-γmRNA 升高更为显著。两单一干预组 Th1 细胞因子 IFN-γ mRNA 表达降低，Th2 细胞因子 IL-4 mRNA 表达升高，而联合干预组 IFN-γ mRNA、IL-4 mRNA 均明显受到抑制，二者的表达都降低。6.血清 IFN-γ、IL-4 水平 EAM 对照组及 IgG 对照组小鼠血清 IFN-γ水平 较正常对照组明显升高（P0.01），IL-4 水平无明显差异。免疫干预后，各干预 组血清 IFN-γ水平显著下调，IL-4 水平则显著上调。联合干预组 IFN-γ水平下 降较单一干预组明显，IL-4 水平各干预组间差异无统计学意义。结论：1．注射猪心肌肌球蛋白可成功诱导出小鼠实验性自身免疫性心肌炎。2．单一 CTLA4-Ig 或抗 CD40L 单抗及二者联合干预，均可减轻心肌炎症浸 润，延缓心肌损伤，联合干预较单一干预效果更为显著。关键词：自身免疫心肌炎CTLA4CD40L免疫干预Effects of intervention with CTLA4-Ig and anti-CD40L monoclonal antibody on mice with experimental autoimmune myocarditisPostgraduate: Zhang Lihu