bclxl基因3′utr let7b靶位点snp对bel7402细胞5fu敏感性的影响word格式论文.docxVIP

英文缩写词索引缩略语HCC英文全称hepatocellularcarcinoma中文译名原发性肝细胞癌SNPsinglenucleotidepolymorphism单核苷酸多态性UTRuntranslated region非翻译区miRNAmicroRNA微小RNABcl-xlPBSB-cell lymphomal/leukemia-extralongphosphate buffer solutionB细胞淋巴瘤/白血病xl磷酸盐缓冲液MDRmultidrugresistance多药耐药PMSFphenylmethylsulfonylfluoridei苯甲基磺酰氟DMSOdimethyl sulfoxide二甲基亚砜FBSfetal bovine serum胎牛血清PVDFpolyvinylidene fluoride聚偏二氟乙烯SDSsodium dodecylsulfate十二烷基硫酸钠cDNAcomplementaryDNA互补脱氧核糖核酸mRNAmessenger RNA信使核糖核酸MTTmethylthiazoletrazolium四噻唑蓝RT-PCRreversetranscriptionpolymerasechain reaction逆转录聚合酶链反应5-FU5-fluorouracil5-氟尿嘧啶1Bcl-xl基因3′UTRlet-7b靶位点SNP对BEL-7402细胞5-FU敏感性的影响研究生：郭锐导师：雷小勇教授中文摘要目的：研究SNP rs3208684(A＞C)对let-7b调控Bcl-xl 基因的影响，以及对肝癌BEL-7402 细胞5-FU 药物敏感性的影响。方法：生物信息学预测Bcl-xl基因3′UTRmiRNA结合位点，结合PUBMEDSNP 数据库搜寻位于miRNA 结合位点内的SNP。体外培养人HCC BEL-7402 细胞，转染miRNAmimics、野生型或突变型pcDNA3.1-Bcl-xl 真核表达载体。采用MTT法检测细胞转染后对5-FU 的敏感性；Westernblot检测Bcl-xl、Bax蛋白的表达；双荧光素酶法验证let-7b对Bcl-xl的靶向作用和SNPrs3208684(A＞C)对let-7b靶向调控Bcl-xl 表达的影响。结果：生物信息学预测软件显示Bcl-xl基因3′UTR存在let-7b的结合位点，结合PUBMEDSNP数据库有哪些信誉好的足球投注网站发现在Bcl-xl基因3′UTRlet-7b结合位点内存在SNP rs3208684(A＞C)。MTT检测、Westernblot 检测，发现let-7bmimics 转染组与正常对照组及let-7b 阴性对照组比较，BEL-7402细胞对5-FU敏感性增加(P0.05)，Bcl-xl蛋白表达下调(P0.05)，但Bax蛋白表达无明显变化。MTT检测、Western blot 检测，发现与let-7b mimics+野生型Bcl-xl 载体共转染组、阴性对照组比较，let-7b mimics+突变型Bcl-xl 载体共转染组Bcl-xl 蛋白表达增高(P0.05)，Bax蛋白无明显改变，BEL-7402细胞对5-FU敏感性降低(P0.05)。MTT检测、Western blot检测，发现与空载体对照组及未转染组比较，野生型Bcl-xl 载体转染组和突变型Bcl-xl载体转染组Bcl-xl蛋白表达均增高(P0.05)，Bax蛋白无明显改变，BEL-7402细胞对5-FU敏感性降低(P0.05)；与野生型Bcl-xl 载体转染组比较，突变型Bcl-xl 载体转染组BEL-7402 细胞对5-FU敏感性显著降低(P0.05)，但2Bcl-xl、Bax蛋白表达无明显差异(P﹥0.05)。双荧光素酶法实验显示，与let-7b 阴性对照+野生型Bcl-xl 3′UTR 载体共转染组比较，let-7b mimics+野生型Bcl-xl 3′UTR 载体共转染组萤火虫荧光素酶活性显著降低(P0.01)；与let-7b 阴性对照+突变型Bcl-xl 3′UTR 载体共转染组比较，let-7b mimics+ 突变型Bcl-xl 3′UTR 载体共转染组萤火虫荧光素酶活性无明显变化(P﹥0.05)。结论：let-7b能够靶向下调Bcl-xl蛋白的表达，增加BEL-7402细胞对5-FU的敏感性；SNPrs3208684(A＞C)能够干扰miRNAlet-7b 对Bcl-xl 基因的靶向调控作用，降低BEL-7402 细胞对5-FU的敏感性。关键词：Bcl-xl；let-7b；单核苷酸多态性；药物敏感性；原发性肝细胞癌3Alet-7bmicroRNA-bindingsitepolymorphismintheBcl-xl3′UTRisassociatedwi