bcma审审fc作为潜在药物的研究word格式论文.docxVIP

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的 研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含为获得 天津大学 或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中 作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解 天津大学有关保留、使用学位论文的规定。 特授权 天津大学 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。（必威体育官网网址的学位论文在解密后适用本授权说明）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘 要B 细胞刺激因子(B cell activating factor from the TNF family ,BLyS)，是肿瘤坏 死因子家族中的一个新的成员，是在1999年发现的一种重要的免疫调节因子，它 存在两种形式：一种是膜结合形式，另一种是可溶性蛋白的形式并且它能够调节 B细胞的分化和生长。B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)是BLyS的 一种受体，它是一种非糖基化的I整合膜蛋白，主要在成熟的B淋巴细胞中表达。 本文中我们主要鉴定了pET30a-BCMA-Fc重组质粒，重新构建一种pET28a-Fc重 组质粒，并对pET30a-BCMA-Fc,pET28a-Fc两种融合蛋白进行了诱导表达，纯化 和生物学活性的鉴定。本文的主要目的是进一步阐述BLyS与其受体的相互关系， 为未来自身免疫疾病和B细胞淋巴瘤的治疗提供一个实验基础。目前为止，我们已经将制备出的Fc片段成功的插入到了pET28a原核表达质粒 中，成功的构建出了pET28a-Fc重组质粒。之后，我们将pET30a-BCMA-Fc和 pET28a-Fc重组质粒转化到大肠杆菌中，分别用IPTG进行诱导，SDS检测， 蛋白A柱进行了纯化，并获得了高纯度的融合蛋白BCMA-Fc和Fc。最后，我们用 酶联免疫吸附试验分析出BCMA-Fc融合蛋白能够特异性的与BLyS结合，并且随 着蛋白浓度的增加而呈现出一定的递增，而Fc不能与BLyS特异性的结合。此外， 我们还验证了拮抗肽BC能够特异性的抑制BCMA-Fc与BLyS的结合作用，并且其 抑制率随着拮抗肽BC浓度的增大而显著增大；而无关肽NRP则不能特异性的抑 制BCMA-Fc与BLyS的结合，只存在少量的非特异性抑制作用。关键词： BLySBCMA 重组质粒 蛋白表达 功能鉴定ABSTRACTBLyS(B cell activating factor from the TNF family),a novel ligand of the tumor necrosis factor family. It exists both as a type II membrane protein and as a soluble protein，which was found in 1999 and regulates B cell proliferation and survival.BCMA(B cell maturation antigen)is a recptor of Blys,which is a nonglycosylated integral membrane type I protein that is preferentially expressed in mature B lymphocytes.In the experimental research,we identified pET30a-BCMA-Fc recombinant plasmid mainly and constructed a new recombinant plasmid(usingNdeⅠand XhoⅠ).Then pET30a-BCMA-Fc and pET28a-Fc recombinant plasmidswere induced by IPTG to express two kinds of corresponding fusion proteins.Subsequently,we have purified the fusion proteins using the protein A column. Last,we also analysed the specific binding capability of fusion proteins of pET3