bcrablbreakpoint cluster regionabelson leukemia virus融合基因激酶区t315i突变质粒的构建word格式论文.docxVIP

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2018-05-18 发布于上海
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bcrablbreakpoint cluster regionabelson leukemia virus融合基因激酶区t315i突变质粒的构建word格式论文.docx

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bcrablbreakpoint cluster regionabelson leukemia virus融合基因激酶区t315i突变质粒的构建word格式论文

变的快速筛查方法，能够用于临床CML患者治疗失败后是否发生已知的常见的点突变检测，进而指导临床治疗方案的调整。关键词：BCR-ABL融合基因；T315I突变；质粒Abstract ConstructionofT315ImutanttypeandwildtypeplasmidforBCR-ABL(BreakpointClusterRegion-AbelsonLeukemiaVirus)fusiongenekinasedomainMaster Graduate:Zhang Xiaohan Advisor: Professor Du XinAbstractObjective:ToconstructT315Imutant typeand wild typeplasmid for BCR-ABL (Breakpoint Cluster Region-AbelsonLeukemiaVirus)fusiongenekinasedomainMethods:WeobtainedthebloodsamplefromtheCMLpatientwithT315I imatinib-resistanceconfirmedbygenesequencing.1.ExtractRNAfromtheseparated leukocyteofthepatient’sbloodsample.2.ThecDNAwasacquiredfromreverse transcriptionofRNAbyusing1ststrandcDNAkit.3.DesignPCRprimeraccordingto T315IpointmutationandacquiredagreatquantityofDNA.4.Jointhetargetgenewith pGEM-TplasmidvectorbyT4DNAligases.5.Usingbacterialtransformation technologytotransfertargetgenetoJM109competentescherichiacoliandcultivate themintheLBculturemediumwhichincludedampicillin.Thencontinuetocultivate themintheLBculturemediumwithampicillin,IPTGandX-gal.6.Choosemonoclonal colonythroughbluewhitescreening.Transformantwithrecombinantplasmidcanonly formwhitecolonyinchromogenicculturemediumforinducing.7.Themonoclonal coloniesproliferateheavilyintheLBculturemediumwithampicillinandduplicate transformedplasmid.8.Usingplasmidextractionkittoextractcultivationplasmid.9. SendhomologousbacterialcolonytoDNAsequencingcompany.TestDNAsequenceof transformedplasmidinmonoclonalcolonybyusingplasmidDNAofsequencing technology.10.SelectT315Imutanttypeplasmidandwildtypecolonytocultivateand extract a great deal of plasmid.Results:WeherebyconstructedT315Imutant type and wild typeplasmid forBCR-ABL(BreakpointClusterRegion-AbelsonLeukemiaVirus)fusiongenekinase domainwhichcouldbethebasisforasimplemethodtotestT315Imutationfor BCR-ABLfusiongenekinasedomain.Conclusions:AsmoreandmoreCMLpatientswithTKItreatmenthaddrug resistancemutations.RecentlyPCRsequencingwasthemaintechniquetodetectpoint mutation.Butthistechniquehadsomedefectssuchascumbersom