bcpdox支架复合大鼠pparγ基因沉默bmsc治疗大鼠骨缺损的实验研究word格式论文.docxVIP

目录英文缩略词表1摘要2 第一章载体的构建、细胞的分离培养及转染14 1 引言142 实验部分162.1 实验试剂与材料162.2 实验方法172.2.1 大鼠BMSC 的分离、培养172.2.2 构建小鼠PPARγ 基因的Tet-On 慢病毒载体并确定其沉默效应17shRNA-PPARγmir 慢病毒表达载体构建17pSM2-PPARγ 慢病毒载体构建17pTRIPZ-PPARγ（表达质粒）载体构建19pTRIPZ-PPARγ 慢病毒包装纯化202.2.3 转染BMSC，评价载体对PPARγ基因的沉默效果212.2.4 成脂、成骨相关基因表达232.2.5 体外实验shRNA-PPARγ 对BMSC 成脂与成骨分化的影响243 结果253.1 骨髓基质干细胞的分离、培养253.2筛选出最佳的RNAi 序列并构建真核表达载体253.3转染大鼠BMSC、评价转染后PPARγ 的沉默效果293.4 成骨、成脂分化相关基因表达323.5将转染大鼠BMSC 向成骨方向诱导分化，ALP 检测333.6成脂诱导、油红-O 染色鉴定354 讨论355 本章小结38第二章HA/PLLA 涂层BCP 支架材料制备、Dox 微球的制备与支架复合391 引言392 实验部分412.1 实验材料4122.2实验方法432.2.1 HA/PLLA涂层多孔BCP支架的制备4羟基磷灰石的制备4β 相磷酸三钙的制备4双相磷酸钙的制备4BCP支架的制备与涂层442.2.2 强力霉素微球的制备4强力霉素标准曲线4线性PLGA-mPEG嵌段共聚物的合成4载强力霉素微球的制备462.2.3 载强力霉素BCP支架的制备462.2.4 多孔BCP/Dox支架分析462.2.5 多孔BCP/Dox支架体外释放实验473结果与讨论473.1双相磷钙的特征47HA/PLLA涂层BCP支架的特性47线性PLGA-mPEG 嵌段共聚物483.4微球的特性493.5Dox、微球、支架材料的FTIR 分析503.6多孔BCP/Dox支架的释药特性534本章小结54第三章复合tBMSC 的多孔BCP/Dox支架治疗大鼠骨缺损的研究551引言552实验部分562.1实验材料与设备562.2实验方法572.2.1 体外实验5细胞粘附率5细胞增殖率58多孔BCP/Dox 支架对tBMSC 成骨分化的影响，对成脂分化的影响582.2.2 体内实验5急性毒性实验5致敏试验60溶血实验602.2.3 多孔BCP/Dox支架的肌肉植入实验612.2.4 复合细胞的多孔BCP/Dox支架的骨缺损植入实验613结果623.1多孔BCP/Dox支架的粘附率、增殖率分析633.2BCP/Dox支架对tBMSC 和BMSC 成骨分化和成脂分化的影响643.3多孔BCP/Dox支架的毒性、致敏及溶血实验分析673.4肌肉植入实验683.5复合tBMSC 的多孔BCP/Dox支架的颅骨修复结果704讨论755本章小结78参考文献79发表论文和参与课题92致谢934英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称BMSCBonemesenchymal stemcells骨髓间充质干细胞tBMSCTransfected mesenchymal stem cells转染的骨髓间充质干细胞PPARγALPPeroxisomepmlifemtor-activated receptor γAlkalinephosphatase过氧化物酶体增殖物激活受体γ碱性磷酸酶PBSPhosphate buffer saline磷酸盐缓冲液FBSFetalBovine Serum胎牛血清DoxDoxycyclinehyclate盐酸强力霉素FBS