猪瘟强毒和疫苗毒RTnPCR鉴别诊断方法的建立与初步应用.pdfVIP

第十三次学术研讨会会议论文集 猪瘟强毒和疫苗毒lml巾CR鉴别诊断方法的建立与初步应用 李安1’2崔言顺+2沈志强+1谢金文1王金良1曲光刚1李峰1李建亮2 (1．山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州，256600 2．山东农业大学动物科技学院，山东泰安，271018；) 摘要对GenB姐k中登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析，在其高度 保守区设计一对通用引物，扩增片段为609bp，并在该对引物扩增区域内设计针对弱毒疫苗的特异引物，扩增 片段为237bp。该方法能将我国流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒与疫苗弱毒完全区分开来，且不与其他猪 源病毒和牛病毒性腹泻病病毒发生非特异反应。应用本研究建立的反转录．复合套式聚合酶链式反应(RT．nPcR) 检测方法可以及早对猪瘟做出准确诊断，并可将强毒感染猪迅速从弱毒疫苗免疫猪群中筛选出来，减少了未感 染免疫猪被误杀的可能性。 关键词猪瘟病毒；反转录．复合套式聚合酶链式反应；兔化弱毒疫苗；鉴别 swine swinefever 猪瘟(Classicalfever’CSF)是由猪瘟病毒(C12LssicalvillJs，CSFV)引起的一种 高度接触性传染病¨J，以稽留高热、出血和高死亡率为主要特征，被世界动物卫生组织(oIE)列 为必须通报的动物疫病瞄J。目前该病主要流行于亚洲、欧洲、南美洲【3】，在家猪和野猪中传播广泛， 发达国家采取捕杀政策来消灭CsF，该病往往给畜牧业带来巨大损失【4】。CSFv属于黄病毒科、瘟病 vhldiarrhea 毒属成员，与其同属的牛病毒性腹泻病病毒(Bovine vinls，BvDv)和羊边界病病毒 诊断上不易将csFV与其他两种瘟病毒相鉴别【5J。近年来，中国猪瘟的流行和发病特点发生了很大 变化，在临床表现上趋于复杂化，出现了所谓“非典型猪瘟”、“温和型猪瘟”和“带毒母猪综合征”，在 病理剖检上也常常不同于典型猪瘟的病理变化，给兽医临床诊断带来了很大困难。猪瘟兔化弱毒疫 苗在我国的大规模应用使猪瘟强毒感染和疫苗接种猪群(只)的区分变得非常困难和必要，亟待建 立一种可以准确区分猪瘟强毒感染与疫苗接种的敏感、特异、重复性好的鉴别检测方法。本研究参 考已经发表的文章建立了一种新的能够准确区分猪瘟强毒和疫苗弱毒的反转录一复合套式PCR (R}nPCR)检测方法，实现了对猪瘟强毒感染的早期快速准确诊断，减少了未感染免疫猪被误杀 的可能性，从而为防止猪瘟的蔓延，并为制定猪瘟防制策略提供了准确可靠的依据。 l材料 1．1菌株与质粒 公司。 1．2试剂 啊zol试剂购自上海生工生物工程有限公司。反转录酶M．MuLv购自北京百泰克生物技术有限 公司。dNTPs、rTaq TaKaRa公司。 1．3 引物设计及合成 P4 期扩增产物为682 bp：P2／P3／P4组成套式PCR内引物，预期扩增产物分别为609bp和237bp。引 物由上海生工生物工程有限公司合成。 基金项目：“十一五”国家科技支撑计划项目(2006BAD06A1禾9)，山东省自主创新成果转化重大专项资助 (2008ZHZXl1103)。 作者简介：李安，男，山东泰安人，硕士研究生，研究方向为动物检疫与食品检验。 ‘通讯作者：崔言顺，教授，Bmail：Y§堡丛i鱼鳗垡12鱼：壁Q盟；沈志强，研究员，Bmail：bzshcnzq@163．com 673 猪的传染病一猪瘟 P1(7085—7104)P2(7157．7178)P3(753Q=7148) _--_．◆_·__．◆__。◆ m．7000 nt．7250 nt．7500 nt．7750 nt．8000