猪干扰素α基因经密码子改造在毕赤酵母菌中的高效分泌表达.pdfVIP

猪的传染病一其他 “无名高热症”的关键。据我们对这些发病猪场的调杏，它们都未对仔猪进行PRRSV和PRV的免疫。 5．4 由于副猪嗜血杆菌在分离时对培养基的要求较高，常规的细菌分离方法不能分离出。因此本研 究选用了适合副猪嗜血杆菌生长的培养基用于细菌分离，避免了由于培养技术不当造成副猪嗜血杆 菌细菌的漏检。 5．5 BvDv感染的症状和病理变化与CSFv非常相似，在临床上很难区分，因此极易造成误诊。在 我们榆测的猪群中40％呈阳性，仅次于PRV感染。而且其中二个猪群呈现单纯的BVDV与细菌的 混合感染，说明它在猪“无名高热症”中的作用不容忽视。我们通过对BVDV感染场的流行病学调查 发现，除了个别猪场有与牛接触的现象外，大部分猪场都与使用污染了BVDV的弱毒疫苗有关。 参考文献(略) 猪干扰素．仅基因经密码子改造在毕赤酵母菌中的高效分泌表达 刘健1 陈瑞爱2朱杰仪1唐明森1罗满林q2 (1．华南农业大学广东广州510642) (2．广东大华农动物保健品股份有限公司广东新兴527439) 摘要根据毕赤酵母表达系统对于密码子的偏嗜性，将去除信号肽的猪干扰素a(P0Ⅱw—a)基因重新设计改造和 重组表达载体，电转化进入野生型毕赤酵母菌x．33中，经zeocinⅢ抗性筛选后获得大量多拷贝插入的重组子， sDs．PAGE和westem blot分析结果表明，所获得的重组子能够分泌表达出19KD左右的Po口FN．a特异蛋白，表达更 容易，其有效蛋白表达量为54．105m叽，并且经Vem—vsv系统测定，PoINF．d效价达到5．87×107U几。试验首次将 猪干扰素a成熟肽蛋白的全基因密码子进行改造，重新设计实现了在毕赤酵母菌表达系统中的Po口PN．a基因的高效 分泌表达。 关键词a干扰素；密码子改造；酵母表达；分泌表达 由单核一吞噬细胞产生，是天然免疫和获得性免疫的桥梁，可以激活NK的细胞毒性并促进其增殖， 调节机体免疫。IFN．n主要足通过对淋巴细胞和巨嗜细胞的调节或诱导MHCI型分子的表达起免疫 调节作用的…，因具有显着的抗病毒功能而被广泛应用于人类病毒性疾病的预防和治疗。随着动物 保健的迫切需求和生物上程技术的不断发展，各种动物干扰素的研究成为几年来的研究热点。 inte疵ron 猪INF．0【(porcine 前23个aa为信号肽，后166个aa为成熟活性蛋白。FrancoisLefever等首先克隆了POIFN—a1成熟 蛋白基冈在大肠杆菌中进行了表达，证明具有较高的抗病毒活性【z—J。 对猪干扰素a的表达豳内学者进行了多项研究，谢海燕等一1克隆了猪I刚．。【基因，构建了原核 表达载体，初步对其进行了原核表达研究。曹瑞兵等【51克隆了一种新的猪IFN．a基因并在大肠杆菌 中进行了其成熟蛋白的单纯表达，杜以军等【6J利用猪IFN—a的成熟蛋白基因构建了重组腺病毒质粒 一种真核表达系统，其有许多优点：可严格调控外源基因的表达、表达产物可得到正确的翻译后修 饰和加工以及易丁进行培养和操作【7粤J。葛丽等Ilo】克隆了猪IFN．旺基因，构建了真核表达载体，初步 对其做了毕赤酵母分泌表达研究。 对于密码子的改变能够影响蚩白的表达的研究，曹瑞兵等对猪删一0【l基因进行了改造，在保留 编码蛋白序列的同时，使用了大肠埃希蒲的偏爱密码子，将合成的猪IFN．Ⅱ1成熟蛋白编码基因插入 原核译纯表达载体pRLc中，实现了猪IFN一。【l在大肠埃希菌中的高效表达【¨j。毕赤酵母表达系统同 样对丁对于密码了具有偏嗜性，赵翔等通过分析毕赤酵母表达系统的28个蛋白编码基因的同意密码 21。本 子的使用情况并计算该酵母的密码子用法，首次确定出P．pastons的19个高表达优越密码子【l 研究基于以上毕赤酵母表达系统对于密码子具有偏嗜性的理论，使PoIFN—a成熟蛋白氨基酸序列不 变，首次通过密码予的改变，进行全序列核苷酸改造，重新合成一条新的碱基序列，使PoIFN．a成 第十三次学术研讨会会议论文集 熟肽能够在毕赤酵母菌表达系统中更容易更好的表达。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1质粒及工程酋 公司产品。 基因工程菌DH