家蝇幼虫抗茵肽粗提物对人肝癌HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响.pdfVIP

第24卷第1期 寄生虫与医学昆虫学报 V01．24．No．1 2017年3月 ActaParasit01．Med．Entom01．Sin． Mar．．2017 doi：10．3969／j．issn．1005-0507．2017．01．006 家蝇幼虫抗茵肽粗提物对人肝癌HepG2细胞凋亡、 钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响术 邢佳欣1 郭 姗1 赵瑞君1 朱爱玉2 刘娟娟h+ 中国人民解放军第264医院妇产科，太原030001) (1．山西医科大学基础医学院寄生虫教研室，太原030001；2 摘要本文从肿瘤细胞凋亡及作用机制的角度出发初步探讨了家蝇幼虫抗菌肽粗提物对人肝癌HepG2细胞 的影响。采用Hoechst33258荧光染色法在荧光显微镜下观察家蝇抗菌肽对HepG2细胞形态学的影响。并 通过流式细胞术分别观察家蝇抗菌肽粗提物对HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响。 Hoechst 33258荧光染色法结果显示家蝇抗菌肽粗提物作用于HepG2细胞48h后能够引起细胞核发生核凝 聚、染色质趋边化、核碎裂等凋亡形态学的改变；流式细胞仪检测结果显示家蝇抗菌肽粗提物能够诱导 HepG2细胞发生凋亡、线粒体膜电位下降、细胞内钙离子浓度增加的现象。因此，我们推测家蝇抗菌肽可 能通过增加HepG2细胞内钙离子，降低线粒体膜电位，进而诱导细胞凋亡的发生。 关键词 家蝇幼虫；抗菌肽粗提物；肝癌HepG2细胞；凋亡；机制 肝癌是我国常见的恶性肿瘤，其发病人数甚 至达到全球患者的40％(王捷等，2013)。由于 1材料与方法 肝癌的发病隐匿，70％～80％的肝癌患者在发现 时已处于中晚期，且伴有肝炎及肝硬化等基础性 1．1细胞株及家蝇三龄幼虫 疾病，这些都给肝癌的治疗带来极大的挑战 肝癌HepG2细胞为山西医科大学免疫教研 室惠赠，购自中科院上海细胞库。本实验室常规 (张宁宁等，2014)。目前针对肝癌全身治疗的 化疗药物如氟尿嘧啶、紫杉醇及吉西他滨等在已 传代培养，液氮保存备用。家蝇三龄幼虫由山西 有的临床Ⅱ、Ⅲ期临床实验中，有效率不足 省疾病预防控制中心虫媒科养蝇室提供并饲养。 20％，而采用多药联合的方案可能提高药物的毒 1．2主要试剂及仪器 副作用，这与肝癌中多药耐药基因(mdrl)高表 达及肝癌患者伴有肝炎等基础性疾病增加药物用 量有着密切联系(林毅等，2007)。 司)、细胞凋亡一Hoechst染色试剂盒、线粒体膜 抗菌肽是一类小分子阳离子多肽，具有抗菌 V— 谱广、对正常细胞无损伤的特异性，相比传统化 FITC／PI双染细胞凋亡检测试剂盒(江苏凯基生 et 疗药，发展前景广阔(Lia1．，2012)。家蝇具 有高速繁殖及高效免疫的能力，从家蝇中提取抗 学研究所)、倒置显微镜(日本奥林巴斯)、 菌肽对多种肿瘤细胞具有抑杀作用，且对正常细 Sep—Pak star自动细胞 胞及机体免疫功能无损害。本文将家蝇抗菌肽作 测定仪(德国艾本德公司)、Count 计数仪(上海睿钰生物科技有限公司)、流式细 用于HepG2细胞，观察家蝇抗菌肽对HepG2细 胞的凋亡、线粒体膜电位及细胞内钙离子的影