还原糖的测定—直接滴定法.docVIP

还原糖的测定—直接滴定法 原理 样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定标定过的碱性酒石酸铜液，以次甲基蓝作指示剂，根据样品液消耗体积，计算还原糖量。 试剂 .1 碱性酒石酸铜甲液 称取15g硫酸铜（CuSO4?5H2O）及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000mL。 .2 碱性酒石酸铜乙液 称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。 .3 乙酸锌溶液 称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。 .4 亚铁氰化钾溶液（10.6+89.4） 称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。 .5 葡萄糖标准溶液（1mg/mL） 精密称取1.000g经过98～100干燥至恒量的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mL盐酸，并以水稀释至1000mL。此溶液每毫升相当于1mg葡萄糖。 .6 盐酸 仪器 .1 实验室常规仪器和设备 .2 古氏坩埚或G4垂融坩埚 操作步骤 .1 样品处理 将样品捣碎混匀待用，样品应避免暴露在空气和阳光下，并尽可能迅速地进行分析。 称取约2.5～5g样品，置于250mL容量瓶中，加50 mL水，摇匀后慢慢加入乙酸锌溶液5mL及亚铁氰化钾溶液（10.6+89.4）5mL，加水至刻度，混匀。静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。 .2 标定碱性酒石酸铜溶液 吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9mL葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同时平行操作三份，取其平均值，计算每10mL（甲、乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。 .3 样品溶液预测 吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积。 .4 样品溶液测定 吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加比预测体积少1mL的样品溶液，使在2min内加热至沸，趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积。 结果计算 按下式计算还原糖的含量： C*V*N 还原糖 (以葡萄糖计,g/L) ＝───── V1 式中： C──葡萄糖标准溶液的浓度，mg/mL；V──标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积，V1—测定时平均消耗样品溶液体积，mLN—被测样品稀释倍数 7 精密度 同一样品两次平行测定值相对差不得超过15%。 1.2.2 空白滴定 精确吸取费林甲、乙液各5mL放入150mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL。再用滴定管加入0.1%葡萄糖标准液9mL。摇匀在电炉(或煤气灯)上加热,使其在2min内沸腾,沸腾30s后,匀速滴入0.1%葡萄糖标准液至蓝色消失即为终点。记录沸腾前后共耗用葡萄糖液毫升数(A)。 1.2.3 预备滴定 精确吸取费林甲、乙液各5mL,放入150mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL,再加1mL10%样品稀释液。根据样品含糖量的高低(估计数),可用糖液滴定管先加入一定量的0.1%葡萄糖液(空白滴定耗用葡萄糖液一般在10mL以上),摇匀加热,沸腾30S后,匀速滴入0.1%葡萄糖液,至蓝色消失即为终点,记下沸腾前后共耗用0.1%葡萄糖标准液毫升数,作正式滴定时参考用。 1.2.4 正式滴定 精确吸取费林甲、乙液各5mL,放入150mL锥形瓶内,加蒸馏水10mL及1mL10%样品稀释液,再用糖液滴定管加入比预备滴定耗用量少0.5mL左右的0.1%葡萄糖标准液,摇匀后加热,使其在1～2min内沸腾,沸腾30S后匀速滴入0.1%葡萄糖标准液至蓝色消失即为终点,记下沸腾前后共耗用0.1%葡萄糖标准液的毫升数 (B)。做平行测定,两次相差不得超过0.1mL。 1.3 计算 (A -B) ×C 还原糖 (以葡萄糖计,g/100mL或g) ＝─────×100………………… (1) W 式中: A——空白滴定耗用0.1%葡萄糖标准液数, mL; B——正式滴定耗用0.1%葡萄糖标准液数, mL; C——1mL0.1%葡萄糖标准液含葡萄量 (即0.001g); W——吸取样液相当样品量