草地藏系绵羊生长激素基因的克隆及序列分析研究.pdfVIP

中国草食动物 2006年 田1 PCR反应体系优化电泳圈 致。1．．4J中。4,7较好。1最差，说明模板浓度一定时，较高Taq 4小结 酶浓度(0．6一o．8u)、引物浓度(10—15pm01)，扩增的效果好。同时，也结合参考资料，制定了优化的PCR反应体系：Taq 3结果与分析 酶0．8U，dntp(10mM)1．5山，10xPCR缓冲液2．0一，上下游 引物各10 扩增的结果见图1 pmol，模板100ng，纯净水补足20山。 草地藏系绵羊生长激素基因的克隆及序列分析 王金玲1，王永1，郑玉才1，胡舻，苏永杰1，刘鲁蜀1，陶永平2 (1．西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都610041；2．四川省若尔盖县畜牧局) 右的片段，连接到PMD-181戢体上。转化到Topl0感受态细胞中培养，经蓝白斑筛选，执取阳性克隆子洲序。结果显示，所 得片段为草地藏系绵羊生长激素(GH)cDNA，与其它绵羊品种GH序列比较同源性为99．69％；与人、牛、山羊、大鼠、小鼠 种一致，与其近缘种山羊亦无差异，与牛GH氨基酸序列同泺性为99．08％。 关键词：草地藏系绵羊；垂体；GH；基因克隆 草地藏系绵羊是川西北牧区广大农牧民重要生产资料和生 梅花鹿、金丝猴、马鹿等GH基因的克隆测序都已有研究报道。 活资料之一，其特点是耐高寒、耐粗饲、适应性强，是川西北牧区 随着动物基因组计划的深入实施，功能基因的克隆测序和定位 的优势畜种和宝贵的基因库。近年来草地藏系绵羊数量增加较 已成为动物遗传育种研究的热点之一。但是有关GH基因的研 究在草地藏系绵羊上还未见报道。本研究从草地藏系绵羊垂体 快，2004年川西北牧区各县共有草地藏系绵羊214．97万只，主 要分布在甘孜州的石渠县、色达县，阿坝州的若尔盖县、阿坝县、 中克隆出生长激素基因，并对其核苷酸序列进行比较分析，为草 红原县等地。如阿坝州目前就有草地藏系绵羊110多万只，仅地藏系绵羊生长特性研究积累基础性研究资料。 若尔盖县就有印余万只，占该县牲畜总头数的二分之一，对当 1材料与方法 地农牧民的生产和生活起着非常重要的作用。科学开发利用草 1．1动物组织的采集 地藏系绵羊这一宝贵的遗传资源，对川西北牧区畜牧业的发展 于11月份在四川省若尔盖地区采集3只成年健康雌性草 具有十分重要的意义。 地藏系绵羊垂体组织、液氮带回实验室，-70℃保存。 生长激素(Growthhormone；GH)是由脑垂体前叶嗜酸性细 1．2实验方法 胞分泌的一种具有广泛生理功能的蛋白质类激素。它通过调节 糖、脂和蛋白质代谢而发挥作用。其作用是将吸收的养分在各 70℃保存。 组织之间重新分配，促进骨、软骨和组织的生长。刺激蛋白质的 cDNA 1．2．2生长激素cDNA的扩增根据已报道的绵羊GH 合成，减少脂肪组织中脂肪合成的养分需要，从而影响养分在动 物体内的代谢。随着基因工程技术的发展。牛、猪等动物的生长 c-I．^GAAG cAGcT^1B^代日脯’．下游引物为：5’嘲AA 激素都已进入工业化生产阶段。其产品能较好地促进乳牛产奶 量的提高和猪的生长，并提高猪的瘦肉比例以及饲料的利用率。 扩增片段为671bp。反转录反应体系参照AMV反转录试剂盒 目