PDGFR-β在子痫前期患者胎盘中的表达及其意义.docVIP

精品论文 参考文献 PDGFR-β在子痫前期患者胎盘中的表达及其意义 谢育娣（厦门大学附属第一医院妇产科 福建厦门 361003） 【中图分类号】R714.24+5 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）48-0020-03 【摘要】 目的 探讨血小板源生长因子受体beta(Platelet derived growth factor receptor beta, PDGFR-?)在子痫前期胎盘中的表达及其意义。方法 采用RT-PCR方法研究40例子痫前期和25例正常妊娠胎盘组织中PDGFR-? mRNA的表达;采用免疫组织化学法研究40例子痫前期和25例正常妊娠胎盘组织中PDGFR-? 蛋白的表达及定位。 结果 子痫前期患者PDGFR-? mRNA及蛋白表达均显著高于正常妊娠组（Plt;0.05）。 结论 子痫前期组胎盘组织PDGFR-?的mRNA、蛋白高表达，PDGFR-?主要表达于绒毛毛细血管内皮，引起胎盘血管的动脉粥样硬化改变（AS），参与子痫前期的病理生理过程。 【关键词】 子痫前期 胎盘 PDGFR-? RT-PCR AS 子痫前期是妊娠期常见病，主要病理变化是全身小动脉痉挛,可能导致全身多器官、多系统受损，胎儿宫内发育迟缓、死胎等不良后果，是围产期母婴死亡的主要原因之一。但其病因尚未明确。近年来研究发现PDGFR过量表达,与血中的血小板源生长因子结合产生生物学效应,导致胎盘及全身血管内皮功能失调,产生高血压、蛋白尿等临床表现[1-2]。本文检测了PDGFR-?在子痫前期患者胎盘组织中的表达,以探讨其在子痫前期中的作用和临床意义。 1 资料与方法 1.1 研究对象和分组：选择2008年10月至2009年6月于厦门大学附属第一医院剖宫娩的轻、重度子痫前期患者各20例。诊断标准参见《妇产科学》第6版[3]。另选取年龄和孕周匹配的正常孕妇25例作为对照组。所有病例均除外其它内外科合并症。病例组和对照组孕妇年龄和孕周差异无统计学意义 (采用成组t检验，t值分别为1.365和1.384，P均gt;0.05，见表1)。 表1 2组孕妇年龄、孕周比较 1.2 标本采集和处理: 两组孕妇分娩后立即取其胎盘母体面（脐带附着处对侧）绒毛膜板下绒毛组织约100mg，用冰生理盐水冲洗血液后立即放入液氮，转移至实验室后贮存于-80deg;C超低温冰箱待行RT-PCR检测。另于该部位处避开梗死和钙化区取胎盘组织约1.0cmtimes;1.0cmtimes;0.5cm大小，立即置于10%福尔马林固定24h，包埋，制作蜡块，待行免疫组化及病理检查。 1.3实验方法 1.3.1 RT-PCR检测胎盘组织中PDGFR-? mRNA的表达 (1)采用Trizol一步法抽提RNA (试剂购自Invitrogen公司)，RNA浓度和纯度经核酸分析仪分析，A260/A280在1.7～2.1之间。 (2)按逆转录试剂盒（购自Promega公司）操作步骤吸取2mu;g总RNA进行逆转录。 (3)PCR反应： 引物序列： PCR反应体系(25mu;l)：cDNA 0.25mu;g，MgCl2 1.5mmol/L, 1.0times;Buffer和dNTP各200mu;mol/L, Taq 酶1.0U/25mu;l, PDGFR-?和GAPDH上下游引物分别为0.2mu;mol/L、0.1mu;mol/L，加去离子水至25mu;l。反应条件：94℃变性30s,59℃退火45s，72℃延伸60s，35个循环，终末延伸10分钟。引物及PCR反应试剂由上海生物工程公司合成；(4)取PCR产物5mu;l电泳、ImageMaster VDS-CL凝胶成像系统扫描，PDGFR-?和GAPDH的电泳条带灰度积分比值表示PDGFR-?的相对表达含量。 1.3.2 免疫组化法测定胎盘组织中PDGFR-beta;的表达及定位 免疫组化S-P法进行测定，一抗为兔抗人PDGFR-beta;多克隆抗体，一抗稀释度为1：100；二抗为鼠抗兔IgG。将蜡块进行切片、按试剂盒说明进行操作。 结果评价标准：光镜（times;100）下观察，细胞膜或（和）细胞质中有棕黄色颗粒为阳性染色。每张切片随机选取高倍（times;100）视野10个，用高清晰彩色病理图像分析系统（HPIAS-100）测定切片图像的阳性反应平均灰度值，即滴加上述一抗后的每张阳性染色切片图像平均灰度值（包括