MSP对COPD大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激和细胞因子产生的影响.docVIP

精品论文 参考文献 MSP对COPD大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激和细胞因子产生的影响 陈小菊 王涛 陈心容 陈小兵（川北医学院附属医院呼吸内科 四川南充 637000） 【中图分类号】R563 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）1-0030-03 【摘要】目的 探讨巨噬细胞刺激蛋白（MSP）对COPD大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激和细胞因子产生的影响。方法 培养正常和COPD大鼠肺泡巨噬细胞，予不同浓度MSP干预，采用酶联免疫法检测细胞上清液中细胞因子TNF-alpha;、IL-8、IL-1beta;和IL-10的浓度，比色法检测细胞上清液中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的水平。结果 经MSP处理后，正常大鼠和COPD大鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF-alpha;、IL-8、IL-1beta;和IL-10呈浓度依赖性增加，而COPD大鼠肺泡巨噬细胞上清液中TNF-alpha;、IL-8和IL-1beta;浓度较正常大鼠增加更显著。MSP呈浓度依赖性刺激正常和COPD大鼠肺泡巨噬细胞分泌MDA增加，抑制其SOD的产生，而COPD大鼠肺泡巨噬细胞上清液中SOD水平较正常大鼠降低更加明显。结论 MSP能显著增加COPD大鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF-alpha;、IL-8和IL-1beta;，抑制其产生SOD。提示MSP在COPD的发病机制中可能起重要作用。 【关键词】 MSP 肺泡巨噬细胞 细胞因子 氧化应激 COPD COPD是以慢性进行性气流受限为主要特征的疾病，伴有肺部的慢性炎症反应，其发病与多种炎性细胞的参与有关。已有研究资料表明，肺泡巨噬细胞及其释放的细胞因子和氧化应激在COPD的发病机制中起重要作用[1]。巨噬细胞刺激蛋白（MSP）又称为类肝细胞生长因子，主要由肝细胞产生，其生物活性作用是通过激活巨噬细胞膜上的特异性受体酪氨酸激酶RON而发挥的[2、3]，包括调节细胞因子的产生及细胞分化、迁移和基质的侵袭等功能[4、5]。研究显示，MSP与间质性肺疾病、支气管扩张症等肺部疾病有关[6]，而它在COPD中的作用目前尚不清楚。本研究采用单纯烟熏建立COPD大鼠模型[7]，予不同浓度的MSP处理离体培养的正常和COPD大鼠肺泡巨噬细胞24h，检测细胞上清液中TNF-alpha;、IL-8、IL-10、IL-1beta;、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的水平，探讨MSP对大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激和细胞因子产生的影响。 1 材料与方法 1.1 材料 雄性Wistar大鼠200g(200plusmn;20)g（川北医学院试验动物中心）；DMEM培养液（hyclone公司）；胎牛血清（hyclone公司）；瑞氏-姬姆萨染色（南京建成科技有限公司）；PBS（北京中杉金桥公司）；TNF-alpha;、IL-8、IL-10和IL-1beta;的ELISA试剂盒（欣博盛生物科技有限公司）；SOD和MDA试剂盒（南京建成科技有限公司）；台盼蓝（sigma公司）；MSP（Ramp;D公司）；酶标仪（Bio-Rad公司）；UV-2550紫外分光光度仪（SHIMADZU公司）。 1.2 动物模型复制 将16只清洁级Wistar大鼠随机分为正常对照组(8只)和COPD组(8只)。COPD组放入自制的吸烟箱中，每次燃烧l0支红梅牌香烟，每天燃烧2次，每次半小时，连续3个月。于烟熏3个月后将动物处死。 1.3 大鼠肺泡巨噬细胞的培养 采用戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔注射麻醉，腹主动脉放血处死大鼠。开胸结扎右侧主支气管，以5ml预热（37℃）的生理盐水灌洗左肺，反复4次，将收集的肺泡灌洗液4℃、1500r/min离心10min。去上清，用PBS洗涤2遍，每次离心10min，然后用含10％胎牛血清、50mu;gml-1链霉素和5Uml-1青霉素的DMEM（低糖）培养液重悬细胞，计数并用台盼蓝染色检测细胞活力，细胞存活率＞98％。将细胞密度???整为1times;109个/L，将其接种于6孔培养板内（1ml/孔）。在37℃、5％CO2的培养箱中贴壁培养2h后，用PBS洗去未贴壁细胞。加入无血清的DMEM（低糖）培养基1ml，然后加入50mu;l不同浓度MSP，置入培养箱内继续培养24h，1000 r/min离心10min，收集细胞上清液。 1.4 ELISA检测TNF-alpha;、IL-8、IL-10和IL-1beta;水平 细胞上清液中TNF-alpha;、IL-8、IL-10和IL-1beta;水平的测定按照ELISA试剂盒说明书操作，最后在酶标仪上读取OD值，根据标准曲线算出浓度。