4种中药散剂微生物限度检查方法验证.docVIP

精品论文 参考文献 4种中药散剂微生物限度检查方法验证 汤为民 陈清华 张雪琴 王艳秋 （江苏七0七天然制药有限公司 212002） 【摘要】目的 建立4种中药散剂微生物限度检查方法。方法 通过接种阳性菌回收率试验测定珠黄散、锡类散、冰硼散、如意金黄散4种中药散剂是否含抑菌成分。结果 如意金黄散供试品试验菌的回收率大于70%，证明无抑菌作用；珠黄散、冰硼散、锡类散有一定的抑菌作用，但可以通过稀释法消除抑菌作用。结论 如意金黄散可以按平皿法进行微生物限度检查；珠黄散、冰硼散、锡类散可以按培养基稀释法进行微生物限度检查。 【关键词】 微生物限度检查 散剂 抑菌作用 方法验证 【中图分类号】R927.1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）20-0038-02 2010年版《中国药典》收载的各中成药品种检查项下，很少规定具体的微生物限度检查方法。微生物限度检查方法必须经过验证试验，含抑菌活性的中成药的微生物限度检查，必须消除供试液抑菌活性后，再根据中国药典规定的方法进行检查。本文锡类散、珠黄散等4种中药散剂建立了微生物限度检查法，以为同行提供一些借鉴。 1 仪器与材料 1.1仪器 细菌培养箱（型号：250-L）常州国华仪器有限公司，霉菌培养箱（型号：MJ-250BS-II）上海新苗医疗器械制造有限公司，立式压力蒸汽灭菌器（型号：LDZX-50FBS）上海申安医疗器械厂。 1.2样品 锡类散(批号：121001、121002、121003)、珠黄散(批号：121101、121102、121103)、冰硼散（批号：120801、120802、120803）、如意金黄散（批号：121201、121202、121203），生产单位：江苏七0七天然制药有限公司； 1.3试验及培养基 pH为7.0的氯化钠一蛋白胨缓冲液、0.9％无菌氯化钠溶液营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基、胆盐乳糖发酵管培养基、改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基、4一甲基伞形酮葡糖苷酸培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基均由中国生物制品检定研究院提供。 1.4菌种 大肠埃希菌【CMCC(B)44102】、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501、金黄色葡萄球菌【CMCC(B)26003】、乙型副伤寒沙门菌【CMCC(B) 50094】、白色念珠菌【CMCC(F)98001】黑曲霉[CMCC(B) 98003]均为江苏省食品药品检验所提供。 2 方法与结果 2.1菌液制备 （1）接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中,置30～35℃培养24小时，分别取上述培养物1ml加9ml 0.9％的无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液。 （2）接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，置23～28℃培养48小时，取上述培养物1ml加9ml 0.9％的无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。 （3）接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中,置23～28℃培养7天，使大量孢子的形成。用5ml0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％的无菌氯化钠溶液将孢子洗脱并过滤孢子悬液至无菌试管内，取1ml加9ml0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数为50～100cfu的孢子悬液。 2.2供试液的制备 称取各样品10g，分别加入pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液至100mI。制成1：10均匀的供试液。 2.3试验方法 平皿法为取1：10的供试液l mL注皿。培养基稀释法为取l：l0的供试液l mL注入2个平皿(0.5 mL／皿)或取l：10的供试液l mL注入5个平皿(0.2mL／皿)。 2.3.1回收率试验 试验组取样品10g。用pH为7.0的无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液稀释至100ml，使成溶解均匀的1：l0的供试液，取1ml注入平皿中，再分别取各试验菌50-100cfu注入同一平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度下，细菌培养24—48 h，白色念珠菌和黑曲霉培养48-72h。菌液组取试验菌50-100cfu注入平皿