体外培养人毛乳头细胞特异性标记物表达的分析.pdfVIP

虫堡医堂差堂美容杂圭 】3年 1Q 筮 19卷 妻 期 ChinJMedAesthCosmet，October2013，Vo1．19，No．5 关_1]。在一定 的信号交换和调控机制作用 下，毛 取第 l--8代 HDPCs进行实验。 乳头细胞 (humandermalpapillacells，HDPCs)能 2．实时定量基因扩增荧光检测 (real—timequan— 够诱导与之相邻 的毛母质细胞分化形成内根鞘和毛 titativePCRdetectingsystem，QPCR)：使用 Trizol 干，因此 ，HDPCs是研究毛囊诱导能力和毛干生长 对 HDPCs提取总 RNA，用 PrimeScriptRT rea— 的重要毛囊细胞。 目前 ，已经能够成功在体外分离 gentKitWithgDNA Eraser试剂盒进行反转录 ， 人毛乳头并进行细胞的传代扩增培养，为研究毛囊 SYBRPremixExTaqTM 11试剂盒进行 QPCR反 组织重建实验提供了基础_l3]。Reynolds等 ¨7]已经 应上机检测 ，使用 Quantitation-ComparativeCt进 证实了在以小 鼠为模型 的毛囊再生实验中，将具有 行分 析 。PCR 引物 的设计 如 下 ：ALP (NM 一 诱导能力的小 鼠HDPCs和上皮细胞共 同移植到裸 000478．4，96bp)：5一GGGATAAAGCAGGTCTT— 鼠皮下，结果发现有大量新生毛囊生成，结构与正常 GGG一3和 5一CTCTTTCTCTGGCACTAAGGAG一 毛囊相似 ，但是单独移植小 鼠上皮细胞却无法诱导 3 ；IGF一1 (NM 一000618．3，96 bp)：5-ATCAG— 毛囊 的新生 ¨8]，证实在毛囊重建过程中，毛囊的真皮 CAGTCTTCCAACCC一3和 5，_CAGGTAGAAGA 成分 HDPCs是诱导毛囊生成的关键因素。 GATGCGAGG一3；l3肌 动 蛋 白 (NM 一0011O1， 有报道认为 ，将 鼠触须毛囊 的HDPCs分离后 ， 186bp)： 5，_TGGCACCCAGCACAATGAA一3 和 在体外进行传代培养的过程中会逐渐丧失其诱导毛 5r_CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA一3 。 囊生成 的能力。因此，具有诱导能力 的 HDPCs是 3．ALP染色 ：参考Yamauchi和Kurosakal_1。。的 进行毛囊重建组织工程实验 的关键 因素。我们将 方法。具体操作如下 ：将 HDPCs爬片从培养箱取 HDPCs在体外进行长期的传代培养后，检测 了与诱 出后，使用 1O 甲醛 甲醇固定液固定约3min后 ，滴 导毛囊生成能力相关的细胞特异性标记物碱性磷酸 加新鲜配制 的底物应用液 ，加盖疏水膜 ，放置湿盒 酶 (AIP)和胰 岛素样生长 因子一1(IGF一1)的表达 中，避光 、37。C孵育 15min后 ，水洗。趁湿用复染液 水平 ，探讨了在体外扩增培养后不 同传代代数 的 苏木素染色约 3min，水洗 ，待干，镜检。 HDPCs的生物学特性 ，为 HDPCs在诱导毛囊重建 结 果 实验中的应用提供 了理论依据 。 一 、 HDPCs的体外培养 材料与方法 使用一步酶消化法将人毛乳头分离后 ，可见人 一 、 材料