运用载体固态发酵产蜡蚧轮枝菌分生孢子的酶活性及抗逆性.pdfVIP

浙江理工大学学报 ，第 27卷，第5期 ，2010年 9月 JournalofZhejiangSciTechUniversity Vo1．27，No．5，Sept．2010 文章编号：1673—3851(2010)05—0824—06 运用载体 固态发酵产蜡蚧轮枝菌 分生孢子的酶活性及抗逆性 俞云峰，石玉杰，徐向群 (浙江理工大学理学院，杭州 310018) 摘 要：采用麦麸固态发酵产蜡蚧轮枝菌菌株 (VerticilliumlecaniiCBS102071)的分生孢子作为标准方法，对 甘蔗渣和聚胺酯泡沫(PU)吸附液体培养基固态发酵产蜡蚧轮枝茵的分生孢子的方法进行评价，并对其三者孢子的 几丁质酶活性和蛋 白酶活性进行测试，结果 3种方法所产孢子几丁质酶活性和蛋 白酶活性较为接近 ，并最终确立 了 孢子最佳采收时间。再对 PU软质泡沫法产生的蜡蚧轮枝菌分生孢子进行抗逆性测试，发现其抗逆环境性能 良好： 在高温 3O、33、35、4O℃下，分生孢子也能萌发，萌发率依次约为97 、85 、32 、1O ；在相对湿度 9O 、85％、81 、 75 、71 、65 下，分生孢子萌发率依次约为 98 、96 、83 、15 、5 、O ；用紫外线辐射 3O～300S时，分生孢 子的萌发率从 96 降到 24 。 关键词：蜡蚧轮枝菌；栽体固体发酵；分生孢子；几丁质酶活性和蛋 白酶活性；抗逆性；萌发率 中图分类号 ：Q8l5 文献标识码 ：A 0 引 言 蜡蚧轮枝菌是一种重要的生物防治真菌，寄主范围广，能寄生蚧类、蚜虫类、螨类、粉虱，还可寄生鳞翅 目 的一些害虫、线虫等，在生物防治中有重要的应用价值 。固态发酵具有设备投资少、能耗低、污染少、容易操 作等特点_1]，非常适用于蜡蚧轮枝菌的治病活体分生孢子的生产E。 惰性载体吸附液态培养基 固态发酵是近年来研究比较广泛而且有很大发展前景的新型固态发酵技术。 具有稳定结构的惰性载体充当固态发酵的固相可以克服载体被分解利用这一缺点，更有利于微生物的生长 和产物产量的增加，如采用聚氨酯泡沫体为吸附载体固态发酵核酸酶P1时，产量 比采用麸皮固态发酵提高 了9倍 。 蜡蚧轮枝菌通过其产生的分生孢子黏附在害虫体表 ，进行萌发产生水解酶类 (蛋 白酶，几丁质酶等)，菌 丝穿透表皮进入体腔不断延伸，吸食害虫营养，导致害虫死亡。因此蜡蚧轮枝菌产蛋 白酶和几丁质酶的能力 在一定程度上可以作为其致病力的表现 4【]。此外，害虫体外的环境因素，如高温、紫外线辐射、低湿度等都对 蜡蚧轮枝菌分生孢子的萌发，和菌丝生长有不同程度的影响，从而影响蜡蚧轮枝菌的稳定性及作为微生物农 药的有效性 ]。 本文主要研究蜡蚧轮枝菌在天然培养基麦麸，惰性载体甘蔗渣和载体聚胺酯泡沫(PU)吸附液体培养基 固态发酵分别产生的分生孢子的几丁质酶和蛋白酶活性的比较，分析 3种发酵方法产生的分生孢子的差异 性，以及确立分生孢子采收的最佳时间和最佳载体，测试其固态发酵生产的蜡蚧轮枝菌分生孢子的抗逆性。 实验数据用SPSS13．O(USA)处理。最终为建立一个可回收利用、便于操作的Pu软质泡沫吸附固态发酵 体系提供基础资料。 收稿 日期 ：2009—10—27 基金项 目：浙江省科技厅重点国际合作项 目(2007C24O16) 作者简介：俞云峰(1983 )，男，浙江嘉兴人，硕士研究生，主要从事载体固态发酵研究。 第 5期 俞云峰等：运用载体固态发酵产蜡蚧轮枝菌分生孢子的酶活性及抗逆性 825 1 材料与方法 1．1 供试菌株 蜡蚧轮枝菌(VerticilliumlecaniiCBS102071)，购买 自荷兰菌种保藏中心，接种于烟粉虱复壮 1次，桃 蚜复壮2次，4~C条件下斜面保存。 1．2 培养条件 1．2．1 胶体几丁质的制备 参照MidhikoKono法_7]。 1．2．2 培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (PDA，g／L)：马铃薯 (去皮)200，葡萄糖 20，琼脂 20。 沙氏琼脂培养基 (SDAY，g／L)：蛋 白胨 1O，葡萄糖 40，琼脂 15，pH=6．0~0．2。 产孢液体培养基 引(g／L)：玉米粉 35．79，酵母膏，