由Survivin启动子驱动的人4-1BBL基因的腺病毒载体的构建.pdfVIP

2010年9月第 27卷第9期 ChinJExpSurg，September2010，Vo)1．! ．! · 1335 · · 实 验 研 究 · 由Survivin启动子驱动的人 4-1BBL基 因的 腺病毒载体的构建 马士签 王飞 李慧 徐淑秀 吴浩荣 【摘要】 目的 构建并鉴定由具有肿瘤特异性启动作用的生存素启动子(SurvivinPromotor)驱 动4-1BBL(CD137Ligand)基因的腺病毒载体。方法 用聚合酶链反应 (PCR)和逆转录(RT)一PCR 的方法，分别从人肺癌细胞株A549中克隆Survivin启动子和共刺激分子 4—1BBL基因，通过 T载体 和转移载体将 目的基因亚克隆到腺病毒载体上 ，293A细胞包装成病毒颗粒 rAD—Survivinpromotor-4— 1BBL，4—1BBL流式抗体检测基因在人喉癌细胞株HEp2及人乳腺细胞株 Hs578Bst上的表达。结 果 通过PCR检测、直接测序证实 目的基因克隆成功并亚克隆到表达载体上，免疫细胞化学方法证 实病毒包装成功，流式检测发现重组腺病毒载体rAD—Survivinpromotor-4—1BBL能够特异性地在肿瘤 细胞 HEp-2上高表达 4-1BBL。结论 由Survivin—promotor驱动4-1BBL基因的具有肿瘤特异性腺病 毒载体构建成功。 【关键词】 Survivin—promotor；4-1BBL；腺病毒载体； 基因治疗 Constructanadenovirusvectorwhichhasan aiminggene4-1BBL drivedbySurvivinpromotor 朋 s 一n， |7、7GFen，LIHui， Shu—xiu， Hao—rong．DepartmentofGeneralSurgery，theSecond AfficiatedHospitaZofSoochowMedicalCollege．Soochow215000。Cina Correspondingauthor：WUHao—rong，Email：mash~nent@sina．con 【Abstract】 Objective Toconstructanadenoviursvectorinsertedaiminggene4-1BBL(CD137 ligand、drivedbySurvivinpromotor．M ethods CloneaiminggeneSurvivinpromotorand4-1BBLbypoly— merasechainreaction(PCR)orreversetranscription(RT)一PCRfromHumanlungcancercellstrainA549 respectively．andsubclonethetwogeneintoanadenoviursexpressionvector．Results TheaiminggenesiS verificatedsucceedcloneandconnectedintoexpression vectorby PCR。directsequencing，immunocyto— chemistryverificatedtheviursiSsucceedpackaged．FCM conformingthat4—1BBLwasspecificexpressedon HED-2cel1．Conclusion Thetumorspecificadenoviursvectorwhichhasanmminggene4—1BBL dfived bySurvivinpromotoriSconsturcted． 【Keywords】 Survivinpromotor；4-1BBL； 喉癌是上呼吸道常见肿瘤 ，占全身恶性肿瘤 的 毒载体，探讨具有肿瘤组织特异性的免疫治疗方法。 2．1％，其病理类型 以鳞状细胞癌为主 ¨。目前 的研 材料与方法 究表明：加强机体的免疫功能可能成为治疗肿瘤 的一 种非常有前景的方法 J。近期的肿瘤特异性的免疫