HIF1α及survivin在胃癌组织中表达及及血管生成关系.docVIP

HIF1α及survivin在胃癌组织中表达及及血管生成关系 　【摘要】 目的: 探讨缺氧诱导因子1α(HIF1α)和凋亡抑制蛋白survivin在胃癌发展过程中的意义及其对肿瘤血管生成的影响. 方法: 应用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测HIF1α和survivin在70例胃癌组织、14例癌旁组织和15例正常组织中的表达,并计数CD105标记癌组织的微血管密度（MVD）. 结果: HIF1α和survivin在胃癌组织中的表达明显高于正常组织及癌旁组织（P＜0.05）；HIF1α和survivin的表达均与胃癌的浸润深度、临床分期及局部淋巴结转移之间存在相关性（Plt;0.05）；HIF1α和survivin表达阳性组的MVD均高于各自的阴性组（Plt;0.05）；HIF1α 和survivin在胃癌中表达存在正相关性（r=0.285,Plt;0.05）. 结论： HIF1α和survivin在胃癌的发展和转移过程中具有重要意义；联合检测两者的表达可用于评价胃癌的恶性生物学行为. 【关键词】 胃肿瘤 缺氧诱导因子1α survivin CD105 　　0引言 　　多数肿瘤的生长具有缺氧的微环境,肿瘤形成的关键步骤就是对缺氧的适应, 缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor1 alpha，HIF1α）是细胞适应缺氧而产生的一种核转录因子. 在多种恶性肿瘤如肠癌、乳腺癌、肺癌等组织中，HIF1α均有过度表达并参与肿瘤血管形成［1］. CD105是一种新型的血管内皮标记物,参与血管生成,在标记肿瘤相关的新生血管内皮上具有更高的特异性［2］. 本实验对70例胃癌、14例癌旁组织、15例正常组织中的HIF1α、凋亡抑制基因及CD105标记的癌组织的微血管密度（MVD）进行了检测，旨在探讨胃癌发生发展过程中因缺氧而造成的HIF1α的表达以及其对肿瘤血管形成的影响，为临床治疗新靶点提供依据. 　　1材料和方法 　　1．1材料兰州大学第一附属医院2003/2005外科手术切除胃腺癌石蜡包埋标本70（男39,女31）例,年龄26～74（平均55.6）岁. 其中高分化21例，中分化30例，低分化19例. 浸润程度:粘膜层18例，肌层33例,达浆膜层19例. 淋巴结转移31例，未转移的39例. 另取该组胃腺癌病例中肿瘤手术切除标本切缘处正常胃粘膜(病理证实)石蜡包埋标本15例及癌旁粘膜14例作为对照. 浓缩型兔抗人HIF1α多克隆抗体购自美国Santa Cruz 公司,工作浓度为1∶150；即用型survivin和CD105鼠抗人单克隆抗体及SP试剂盒均购自北京中杉公司. 　　1.2方法 　　1.2.1染色方法已知阳性切片做阳性对照，以PBS代替一抗作空白对照. 福尔马林固定胃腺癌标本，石蜡切片58℃烤4 h，常规脱蜡至水，抗原修复（98℃）20 min，PBS洗3×3 min.3 mL/L H2O2抑制内源性过氧化物酶，室温20 min，PBS洗3×3 min，滴加二抗正常血清，室温孵育10 min，不洗切片分别滴加浓缩型兔抗人HIF1α多克隆抗体(1∶150）、即用型survivin和CD105鼠抗人单克隆抗体于温盒内37℃,1 h，PBS洗3×3 min，滴加二抗，温盒内37℃，10 min，PBS洗3×3 min，DAB显色8～10 min，自来水终止反应，苏木精衬染60 s，水洗蓝化，常规脱水树胶封片. 　　1.2.2结果判断HIF1α，survivin阳性染色为淡黄色、棕黄色或棕褐色，采用二级计分法，即以染色强度与阳性细胞的百分比的乘积做为半定量标准：染色强度：0分为无色；1分为黄色；2分为棕黄色；3分为棕褐色（深浅与背景色相对比）. 阳性细胞所占的百分比：阳性细胞≤10%为1分；10%～50%为2分；51%～75%为3分；gt;75%为4分. 染色强度与阳性细胞所占的百分比的乘积0～3分为阴性（-）；gt;3分为免疫反应阳性（+）［3］. 　　1.2.3MVD计数以CD105为血管标记物的MVD计数参照Weidner 等［4］的标准,略改动. 在低倍镜下(100×)寻找整张切片中富含血管组织的“热点”(hot spot) 区,即棕黄染色密度最高的区域. 在高倍镜下(400×)计数其内的血管数目,每张切片上分别选择3 个不同高倍视野计数,结果取其平均值. 　　统计学处理: 应用SPSS11.0版本统计学软件对结果进行分析. 两样本均数比较行t检验，计数资料比较用χ2检验，以P≤0.05为差异有统计学意义. 　　2结果 　　2.1HIF1α和survivin的表达HIF1α和survivin染色的阳性细胞在组织中呈弥漫和(或)散在分布，HIF1α着色部位主要在肿瘤