细胞骨架连接分子Ezrin和CD44v6对胃癌生长和转移影响.pdfVIP

·英文缩略语· 5 ·论文· 转移的关系 刖 罱 胃癌的侵袭和转移是影响患者预后的重要因素，深入研究其机制对于改善胃 癌患者的总体预后有重要作用。埃兹蛋I刍(Ezrin)首先在1981年在鸡的肠上皮绒毛 中发现(¨，它富含于含肌动蛋白的细胞绒毛和细胞膜的皱襞中并参与上皮细胞的 胞表面受体和肌动蛋白的细胞骨架。近年研究表明，Ezrin通过调节黏附分子和介导 细胞信号转导途径，参与细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间的相互作用，在肿瘤细 胞的侵袭和转移过程中起重要作用(2·1m。CD44基因编码两种不同类型的蛋白即标 密切相关的细胞表面因子，研究发现，它与Ezrin共同表达于多种恶性肿瘤中，参与了 统计二者之间表达的相关性及其表达水平与临床各病理学参数之间的关系。 资料与方法 一、标本来源 收集中国医科大学附属盛京医院2009年lO月．2010年3月间手术切除并经病 理科证实为胃癌的标本84例，其中男性62例，女性22例，年龄35．82岁，全部 标本手术前均未接受放疗和化疗。组织学分型：乳头状腺癌2例，高分化管状腺 癌10例，中分化管状腺癌37例，低分化管状腺癌26例，粘液腺癌8例，印戒细 胞癌l例，未分化癌0例。浸润深度：粘膜及粘膜下层O例，肌层2例，浆膜下 层5例，穿出浆膜层77例。淋巴结转移：无淋巴结转移21例，有淋巴结转移63 例，BorrmannlV型18例。 6 二、试剂及相关设备 1、主要试剂 Ezrin单克隆抗体(购自SANTA公司) CD44v6多克隆抗体(购自北京博奥森生物技术有限公司) 2、所需仪器 切片机 自动脱水机 微波炉 温育箱 三、实验步骤 l、免疫组织化学步骤如下 (1)石蜡切片：在标本病灶直径全层切取胃癌组织，以癌灶5厘米以上正常 胃组织为对照，病例组及对照组经福尔马林固定，石蜡包埋后4微米连续切片。 ％乙醇(10min)一蒸馏水(5min)_PBS缓冲液3minx3次 (3)抗原修复：0．01M柠檬酸缓冲液(PH6．O)将切片浸入其中微波炉中煮 沸5minx3次后冷却至室温。 (4)PBS冲洗3minx3次。 (5)阻断内源性过氧化物酶：滴加3％双氧水室温下孵育10rain。 (6)PBS缓冲液冲洗3minx3次。 (7)滴加山羊血清工作液室温下孵育20min后倾去。 (8)滴加一抗：4。C冰箱，孵育过夜。 (9)PBS冲洗3minx3次。 (10)滴加生物素化二抗工作液37℃孵育20min。 (11)PBS冲洗3minx3次。 (12)滴加辣根酶连酶卵白素工作液37℃孵育20rain。 7 (13)PBS冲洗3min×3次。 (14)DAB显色：0．8毫升去离子水A液B液C液各加入1滴；每张切片滴 加2滴，镜下控制反应，蒸馏水终止显色。 (15)苏木素复染30秒一蒸馏水漂洗10分钟(反蓝)。 (10min)_二甲苯(10min)一中性树胶封片四、结果判断。 四、结果判定 200个细胞，共1000个细胞，计算阳性细胞的比率，当阳性细胞小于或等于10 ％为阴性，无论其染色强度如何记为0分。阳性细胞为11．50％记为2分，阳性细 胞为51．80％记为3分，阳性细胞多余80％记为4分。根据着色程度：着色若但 明显强于阴性对照的为1分，中等强度为2分，高强度为3分。以上相加：按以 上积分结果0．2分(．)，3分(+)，4．5分(++)，6．7分(}H)。 Ezrin在胃癌组织中的 CD44v6在胃癌组织中的 阳性表达(S-P法×400) 阳性表达(S．P法x400) 五、统计学分析 用SPSSl3．0统计软件进行数据统计，各组行f检验，当P0．05时有统计学 意义。