禽流感HA-HI试验操作要领与注意事项.pdfVIP

畜牧兽医 基l昙空问 禽流感HA—H I试验操作要领与注意事项 肖爱波 (辽宁省畜产品安全监察所，辽宁 沈阳 11 0003) 中图分类号 $852．4 文献标识码 B 文章编号 1672—9692(201 1)l 1-0049—02 禽流感HA—HI试验是目前WHO和OIE进行 来源必须为SPF公鸡或无禽流感和新城疫等抗体 全球流感监测所普遍采用的试验方法，可用于流 的健康公鸡。应特别关注所测病原的抗体是否存 感病毒分离株HA亚型的鉴定，也可用来检测禽 在于鸡体内。鸡血液的采集应规范，保证无菌操 血清中是否有与抗原亚型_致的感染或免疫抗 作，避免杂菌污染，因为污染所造成的非流感起 体。禽流感HA—HI试验是兽医工作者广为熟知 源的凝集素也可与所有抗原血清发生非特异性反 的一项最常用的实验室检验项目，但由于该试验 应，同时采血时应避免溶血和凝血现象发生。建 人为主观因素较多，每一细微步骤都会影响到试 议使用与血清来源相同的禽种红细胞。 验结果。本文就禽流感HA—HI试验的操作要领 3．1．2 血细胞应根据所需确定所取，血细胞的 与注意事项作以简要阐述，以供参考。 洗涤应保证上清液为透明状为准，洗涤过程中注 1 概述 意轻柔吹打和混匀，同时应注意每次洗涤时更换 流感病毒颗粒表面的血凝素(HA)蛋白，具 吸管，尤其在吸取血细胞时。 有识别并吸附于红细胞表面受体的结构，HA试 3．1．3 1％红细胞悬液制备中最后一次洗涤为 验由此得名。HA蛋白的抗体与受体的特异性结 3 000 r／min或2 000 g离心10 min进行红细胞压积。 合能够干扰HA蛋白与红细胞受体的结合从而出 3．1．4 洗涤后的血细胞加入PBS配制成的l％红 现抑制现象，即HI试验。 细胞悬液应放置4 c《=环境中60 min左右进行观 目前，我国禽流感HA—HI试验的主要 察，无溶血等异常后再置室温中进行试验。 依据是《高致病性禽流感诊断技术》(GB／T 3．1．5 除鸡外有些禽的血清可能对鸡红细胞产 18936—2003)~H《高致病性禽流感免疫技术规范》 生非特异性的凝集。当确认这种特性时，用鸡红 (NY／T 769—2004)。 细胞对试验血清进行吸附，可以去除非特异凝集 2 HA-HI试验的优缺点 素、非特异性凝集抑制素，或者选用在调查研究 2．1优点 ①可用来鉴定所有的流感病毒分离 中的禽种红细胞。吸附方法是在每0．5 m1的抗血 株；②可用来检测禽血清中的感染或免疫抗体； 清中加入0．025 ml的鸡红细胞，轻摇后静置至少 ③试验方法简便，易操作。 30 rain；800 g离心2～5 rain，收集上清，即为处 2．2缺点 ①只有当抗原和抗体HA亚型相一 理后的血清。亦可用被检禽种的红细胞。 致时才能出现HI现象，各亚型间无明显交叉反 3．2 HA-HI试验 应。②除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物 3．2．1 建议使用9O度v型一次性优质塑料反应 和水禽的血清时，需要除去存在于血清中的非特 板进行HA—HI试验。 异凝集素；对于其他禽种，也可以考虑选用在调 3．2．2 反应试剂应按规定保存和使用。冻干的 查研究中的禽种红细胞。③需要在每次试验时进 试剂应按照说明中规定的体积重新溶解并保存。 行抗原标准化。④需要正确判读结果的技能，人 为避免反复冻融和细菌污染，建议以无菌操作将 为主观因素比较多。 ‘ 试剂分装成小包装，因为反复冻融比4℃放置更 3 操作要领和注意事项 易降低反应试剂的效价。 3．1 1％红细胞悬液来源与配制 3．2．3 HA试验时，最好