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第37卷 分析化学(FENxIHuAxUE)研究简报 第4期 Chinese of 577—580 2009年4月 JournalAnalyticalChemistry 直接竞争酶联免疫吸附分析法测定氰戊菊酯 尤海琴 刘浪 刘曙照+ (扬州大学环境科学与工程学院，扬州225009) 摘要采用活性酯法，将氰戊菊酯半抗原』v-[2一(4．氯苯基)一3．甲基丁酰基]-4一氨基丁酸与载体蛋白共价偶 联合成突出氰戊菊酯分子结构特征的人工抗原和包被原。以人工抗原免疫新西兰白兔制备抗血清。采用 (NH。)：sO。分步盐析和DEAE纤维素柱层析法从抗血清中分离纯化对氰戊菊酯具特异性亲和力的抗体，采 用活性酯法，以辣根过氧化物酶标记半抗原，v．[2．(4．氯苯基)．3．甲基丁酰基]-6．氨基己酸。采用固定抗体、 氰戊菊酯和酶标半抗原直接竞争结合固相抗体的模式，建立对氰戊菊酯具高特异性的酶联免疫吸附分析方 法。在优化条件下，测定氰戊菊酯标样检测的线性浓度范围为O．00l—lO．Om吕／L；检出限O．001mg／L；相 对标准偏差(RsD，n=5)为9．19％。小白菜中分别添加0．10和5．0mg／kg氰戊菊酯，直接竞争酶联免疫吸 11．7％和7．25％。对实际样品的有效检出限为0．007mg／L。其它常用拟除虫菊酯类杀虫剂(氯氰菊酯、溴氰 菊脂、功夫菊酯、醚菊酯、联苯菊酯)不干扰氰戊菊酯的测定。 关键词氰戊菊酯，半抗原，人工抗原，抗体，直接竞争酶联免疫吸附分析 引 言 氰戊菊酯是一种应用广泛的拟除虫菊酯类杀虫剂，对危害棉花、果蔬、茶、大豆、小麦等农作物的鳞 翅目、同翅目、直翅目、半翅日害虫的幼虫有良好的防治效果，也可防治地老虎等夜蛾科害虫…。氰戊 菊酯对大鼠的毒性中等，对鱼和其它水生生物毒性大。人误服氰戊菊酯可引起呕吐、神经过敏、悸惧、流 涎等症状，严重时发生震颤和全身痉挛。“。目前，氰戊菊酯是我国拟除虫菊酯类农药中使用量最大的 品种，农产品中氰戊菊酯残留超标直接影响食品安全，对环境构成一定威胁。我国强制性国家标准规 定，氰戊菊酯最大残留限量：叶菜类为0．5mg／kg，谷类(原粮)、果类菜、水果为0．2mg／kg，根块类为 0．05 mg／kg。欧盟最近将氰戊菊酯定为农产品中不得检出的农药品种一o，严重影响我国茶叶等农产品 的出口。 目前已报道的氰戊菊酯残留检测方法主要有高效液相色谱法_≯1、气相色谱法¨t7o和气质联用 法¨1。采用这些方法需要比较昂贵的仪器设备、专业化的实验室和训练有素的专门人才，对样品前处 理的要求高、速度慢，难以适应大量样本和现场快速检测的要求。免疫分析具有特异性强、灵敏度高、方 便快捷、廉价高效、不需要贵重仪器及可多个样品同时测定等优势。…。国外报道以顺式氰戊菊酯整个 分子的衍生物为半抗原制备免疫原，免疫动物所获抗体与其它一些结构类似的拟除虫菊酯类农药有较 明显的交叉反应，所建立的间接竞争免疫分析法步骤较多。1叭。本研究建立了氰戊菊酯的直接竞争酶联 免疫吸附分析技术，操作简便、快速，特异性高，为氰戊菊酯残留的快速检测提供了一种新方法。 2 实验部分 2．1试剂、材料及仪器 基]一6-氨基己酸(本实验室合成)；聚乙二醇20moL／L，进口分装；辣根过氧化物酶(HRP，北京拜尔迪生 物技术有限公司)；氯甲酸异丁酯、牛血清白蛋白、卵清蛋白、透析袋(美国sigma公司)；Ⅳ．羟基琥珀酰 亚胺、二环己基碳二亚胺(德国MERCK)；卡介苗(上海生物制品研究所)；弗氏不完全佐剂(羊毛脂：石 2008107．20收稿；2008·ll-02接受 本文系国家自然科学基金(No．207770“)资助项目 ·E-mail：szIju@y跚．edu．cn 578 分析化学 第37卷 mol／L硼酸盐缓冲液 蜡油=l：3)，自制；弗氏完全佐剂(弗氏不完全佐剂加卡介苗)，自制；0．05