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肿瘤相关巨噬细胞自噬状态对大肠癌细胞放射敏感性的影响 中文摘 肿瘤相关巨噬细胞自噬状态对大肠癌细胞 放射敏感性的影响 中文摘要 目的：研究肿瘤相关巨噬细胞自噬调控后对大肠癌LOVO细胞放射敏感性的影 响。 方法：使用佛波酯PMA、人重组IL-4诱导人单核白血病细胞THP-1分化为肿 瘤相关巨噬细胞 （Tumorassociatedmacrophages，TAM）后，镜下观察细胞形态并 CD68 CD204 CD20 使用流式细胞仪检测其表面 、 、 分子表达情况；分别使用一定 浓度的RAD001，Bafilomycina1对TAM 的自噬状态进行调控，应用MDC荧光染 TAM 1 3 色法观察 自噬囊泡形成，免疫荧光检测自噬特异性微管相关蛋白 轻链 （microtubule-associatedprotein 1lightchain3 ，LC3）表达；利用Transwell小室将 不同自噬状态的TAM与大肠癌细胞行非接触式共培养，实验分组为TAM 自噬上调 组、下调组、未调组及单独大肠癌LOVO细胞的空白对照组4组，各组经4Gy射线 照射后分别行大肠癌细胞克隆集落形成、细胞存活分数、凋亡细胞比例、放射敏感 相关蛋白Bcl-2、Survivin、Smac表达水平的检测。 结果：人单核白血病细胞THP-1在经过佛波酯PMA、人重组IL-4依次作用总 计72小时后，所得TAM表面CD68、CD204、CD20 表达水平（依次为62.32± 1.58%、33.49±2.11%、52.42±2.65%）显著高于未经处理的THP-1细胞（依次为 39.69 1.59% 8.5 1.25% 7.93 0.53% PMA ± 、 ± 、 ± ）和只经 作用得到的未活化巨噬细 胞（依次为49.72±1.82%、7.90±1.19%、14.39±0.85%） （P0.05）。分别使用 RAD001，Bafilomycina1调控TAM 自噬水平后发现，自噬上调组中MDC染色的自 噬囊泡数目多于自噬未调组，LC3荧光也强于自噬未调组；自噬下调组中MDC染 色的自噬囊泡数目少于自噬未调组，LC3荧光强度则弱于自噬未调组；且药物的自 噬调控作用可维持至少48h。共培养细胞同时接受照射处理后，TAM 自噬未调组中 7.12 0.14% 71.12 0.34% 大肠癌细胞克隆形成率（ ± ）与存活分数（ ± ）均高于对照组 I 中文摘 肿瘤相关巨噬细胞自噬状态对大肠癌细胞放射敏感性的影响 （分别为3.98±0.73%、39.7±1.14%），TAM可促进大肠癌细胞增殖 （P0.05）； 改变TAM 自噬状态可影响其促大肠癌细胞增殖效应：TAM 自噬上调组大肠癌细胞 4.21 0.18% 7.12 0.14% 克隆形成率为（ ± ），低于自噬未调组 （ ± ）和自噬下调组 （5.28±0.23%），提高TAM的自噬水平可抑制其促大肠癌细胞增殖效应，且抑制 效果较下调TAM 自噬水平更为显著（P0.05）。AnnexinV/PI双染检测大肠癌细胞 凋亡显示：共培养组中大肠癌细胞凋亡率（分别为36.84±0.37%、43.23±1.34%、 29.37±0.82%）均高于对照组 （27.23±0.63%），TAM可诱导大肠癌细胞凋亡的发 P0.05 TAM