吉林大学实验课件-土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏.pptVIP

微生物学实验——土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏 指导教师：王丽萍 实验流程 相关理论知识（1） 微生物的分离与纯化 从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。 常用的分离、纯化方法 微生物能在固体培养基上长成菌落，通常一个菌株可以长成一个菌落。因此可通过挑取单菌落而获得一种微生物。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。 相关理论知识（2） 土壤中的微生物 土壤是微生物生长繁殖的天然培养基 ，是人类最丰富的“菌种资源库”。 不同类型的土壤、同一类型土壤的不同深度或不同水平位置，微生物种类和数量变化很大。 由于表层土壤比较干燥，且接受大量紫外线照射，所以微生物主要分布在营养条件良好、氧气含量比较丰富的浅土层 乳酸乳球菌 乳酸乳球菌是一类能在碳水化合物中，发酵产生大量乳酸的细菌，它在酸奶中大量存在。 目的要求 1、了解微生物分离和纯化的原理 。 2、掌握常用的分离纯化微生物的方法。 3、掌握倒平板的方法。 4、进一步熟练和掌握微生物的无菌操作技术。 5、掌握微生物的培养方法。 实验原理 微生物分离与纯化 从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程。 平板分离法 普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理是选择适合于微生物生长的培养条件（如营养成分、酸碱度、温度和氧等,或加入某种抑制剂），在平板上培养微生物，当平板上长出单菌落后，挑取，得到纯种的微生物  试剂与器材 1、材料 含大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、乳酸乳球菌、黑曲霉、根霉、青霉和放线菌的土壤样品，牛肉膏蛋白胨培养基（斜面、液体、半固体）、马丁氏培养基、查氏培养基等 2、试剂 10%酚、4%水琼脂 3、器材 盛9mL无菌水的试管、盛90mL无菌水并带有玻璃珠的三角瓶、涂布器、无菌吸管、接种环，酒精灯、无菌培养皿、显微镜、细胞计数板等。 牛肉膏蛋白胨培养基 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g 用水定容至 1000ml pH 7.0-7.2 用于分离细菌 高氏一号培养基 可溶淀粉 20g KNO3 1g NaCl 0.5g K2HPO4 0.5g MgSO4 0.5g FeSO4 0.01g 琼脂 15-20g pH 7.2-7.4 用水定容至 1000ml 用于分离放线菌 查氏培养基 NaNO3 2g K2HPO4 1g KCl 0.5g MgSO4 0.5g FeSO4 0.01g 蔗糖 30g 琼脂 15-20g 用水定容至 1000ml 用于分离霉菌 马丁氏培养基 葡萄糖 10g 蛋白胨 5g K2HPO4 1g MgSO4 0.5g FeSO4 0.01g 琼脂 15-20g pH 自然 用水定容至 800ml 用于分离酵母菌 CM固体培养基 蔗糖 10g 蛋白胨 10g 酵母浸膏 10g K2HPO4 10g NaCl 2g MgSO4 0.2g 琼脂 15-20g 自然pH 定容至1000ml 实验步骤 注意事项 1、接种环要灼烧灭菌。接触菌体前要冷却。 接种后要在火焰上灼烧。 2、实验在洁净工作台内进行，操作时菌体不 应和火焰太过接近。 3、本实验要严格地按照无菌操作进行。 4、培养时要倒置培养，防止染菌。 5、取单菌落时不要碰到其它的菌落。 细菌的形态结构观察 相关理论知识 细菌形态 群体的形态 细菌菌落大多表面光滑湿润，有光泽，一般菌落较小，质地颜色均匀，同培养基结合不紧密。菌落特征与组成菌落的细胞结构、生长状况、排列方式、好气性和运动性直接相关。 个体的形态 主要分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类，