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PAGE  结核分枝杆菌耐药突变基因检测 项 目 介 绍 书 亚能生物技术（深圳）有限公司 公司简介 亚能生物技术（深圳）有限公司（简称“亚能生物”） 由香港亚能投资集团创办于 2001年，2010年成为中国500强企业上海复星医药（集团）股份有限公司（证券码600196）的控股成员，是科技部认定的国家级高新技术企业。 亚能生物依靠自主创新，开发了实用型基因诊断芯片技术平台，成功研发出人乳头瘤病毒(HPV)基因分型检测芯片、地中海贫血基因检测芯片、乙肝病毒（HBV）分型及耐药突变基因检测芯片、结核分枝杆菌（MTB）耐药突变基因检测芯片、分枝杆菌菌种鉴定基因检测芯片和Y染色体微缺失检测试剂盒等多位点检测产品；开发了基因芯片杂交仪、阅读仪等配套设备。累计申请中国专利20项，现已获得授权12项，并率先在中国实现了基因芯片技术的产业化。 2003年通过ISO9001/13485质量管理体系认证，2006年被科技局认定为深圳市高新技术企业，2009年被科技部认定为国家级高新技术企业。亚能基因芯片检测产品已获业界充分肯定，产品已在全国数百家医院和科研机构广泛使用。在“2009中国检验医学年度评选”活动中，亚能生物生产的人乳头瘤病毒（HPV）基因分型检测试剂盒荣获“十大先进试剂”称号，成为当年该项评选中唯一获奖的HPV检测产品。2010年该产品成为国家卫生部“子宫颈癌的预防及癌前期病变规范化诊断与治疗推广”项目的指定产品；2011年该产品荣获“深圳市自主创新产品”称号。随着新产品的陆续上市和全国性推广，亚能生物正以更强的实力、更快的速度向前发展。 结核分枝杆菌耐药突变基因检测项目介绍 一、背景介绍 1. 结核病现状 近年来，由于人口流动增加、耐药结核增多以及结核杆菌与艾滋病合并感染等原因，结核病在全球呈明显上升趋势。耐多药肺结核危害日益凸显，每年新发患者人数约12万，未来数年内可能出现以耐药菌为主的结核病流行态势。2010年全国结核病流行病学抽样调查结果显示，全国15岁以上人群中有活动性肺结核患者499万，涂阳肺结核患者72万，菌阳肺结核患者129万。我国现有15岁及以上耐多药肺结核患者33.9万，广泛耐药患者10.5万。加强结核防治知识宣传，早发现、早诊断、早治疗痰菌阳性的肺结核患者，是防治结核病流行、保障人民群众健康安全的关键。 结核病耐药性 目前治疗结核病的一线药物有:利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素等，是治疗结核病的首选药。由于抗结核药物的不规范治疗，病人体内的结核菌对多种抗结核药物产生耐受性，从而导致耐多药结核病例增加。世界卫生组织对耐药性肺结核的调查表明：在每年记录的600 - 800 万新病例中，有10 %的患者至少耐一种结核药，有2 %的患者耐两种以上的结核药。经研究发现，利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素四种抗结核药物的耐药基因如下表： 抗结核药物耐药基因耐药基因占比利福平RpoB90%以上异烟肼KatG50%-70%InhA5-10%链霉素RpsL80%乙胺丁醇EmbB85%通过检测这些耐药基因相关位点的突变来判断结核分枝杆菌的耐药性，检测结果具有很好的特异性、敏感性和准确性。 3. 结核耐药检测方法介绍 目前国内外结核病耐药性检测方法有以下几类： 3.1药敏培养法 药敏培养法检测结核菌的耐药性是目前常用的耐药检测方法，该方法直观，可以同时检测多种药物，包括抗结核的一线及二线药物。存在的问题是培养所需时间长，要4-6周才能得到耐药的信息，使结核病不能达到及时的治疗。并且培养的灵敏度较低，容易出现假阴性。 3.2 测序法 该方法检测准确，可以检测到一个碱基的变化，能确定突变位置及类型。但是该方法存在的问题是整个测序过程相当烦琐，检测通量小，而且需要专门的技术人员进行操作，对操作人员的技术要求高。而且测序仪的费用是相当昂贵的，不适合于临床的推广。 3.3 基因芯片法 基因芯片诊断技术，是目前最先进的基因诊断技术。该方法是将多种特定序列的DNA片段（探针），有规律地固定于支持物上，构成一个二维的DNA探针阵列，与计算机的电子芯片相似，故被称为基因芯片。基因芯片将高灵敏度的PCR技术和高特异性的核酸分子杂交技术进行了完美的结合，并将多个检测目标整合在同一张芯片中，可实现检测的高通量。亚能生物的基因芯片技术已广泛用于临床分子诊断领域。 二、亚能生物结核耐药突变基因检测介绍 国食药监（械）准字2011第3401177号 技术平台： 技术方法：基因芯片技术（PCR-反向点杂交技术） 技术原理：设计特异性引物、固定在膜条上形成二维DNA探针阵列，对待测样品中可能存在的MTB耐药突变基因进行PCR扩增并进行生物素标记，再将PCR扩增产物与固定在膜芯片上的基因型特