小儿化毒系列制剂中非法添加松香酸的检测方法讨论.docVIP

小儿化毒系列制剂中非法添加松香酸的检测方法讨论 　“小儿化毒”系列品种分为散剂和胶囊剂两种剂型。处方由人工牛黄、黄连、天花粉、川贝母、乳香(制)没药(制)和冰片等十二味药组成，具有清热解毒，活血消肿之功效。其中乳香、没药均为进口药材，价格昂贵，为降低成本，市面上掺伪现象屡见不鲜。其中，最常见的掺伪方式是将松香酸添加到乳香和没药中，利用松香酸的特殊香气，以次充好，或以假乱真。松香酸是松科松属植物中渗出的油树脂经蒸馏或提取，除去挥发油后所余的固体树脂，具有毒性。因此，有必要对药品中是否非法添加松香酸进行检测。现已有采用HPLC-UV 法检测中成药中乳香及没药中是否掺有松香酸的报道，但能排除假阳性干扰的检测方法较少，故本文中除采用HPLC-UV 法对松香酸进行检测外，还采用了HPLC-DAD 法和HPLC-MS 法对其检测阳性结果进行进一步确证。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　岛津LC-2010 高效液相色谱;高效液相色谱- 质谱联用仪(Thermo Ultimate 3000 液相色谱仪;LCQFleet质谱);岛津SPD-M10AVP 检测器;ThermofisherC18 色谱柱(150 mmtimes;2.1 mm，5 mu;m);Aglilent C18 色谱柱(250 mmtimes;4.6 mm，5 mu;m);Kiomosil C18 色谱柱(250 mmtimes;4.6 mm，5 mu;m);Techmate C18 色谱柱(250 mmtimes; 4.6 mm，5 mu;m)。 　　1.2 试剂与试药 　　甲醇、甲酸、四氢呋喃为色谱纯，其余试剂均为分析纯。松香酸(北京振翔工贸有限责任公司，批号：514-10-3);乳香酸(中国药品生物制品检定所，批号：111760-200601)。小儿化毒制剂均为国家药品评价抽验样品。 　　2 方法与结果 　　2.1 高效液相色谱法 　　2.1.1 色谱条件 　　用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈- 四氢呋喃-0.1% 甲酸(45:25:30)为流动相;流速：1. 0 mL·min-1;检测波长：241 nm;柱温: 30℃;进样量：10 mu;L。 　　2.1.2 溶液的配制 　　取松香酸对照品适量，加乙醇制成每1 mL 含10 mu;g 的溶液，作为对照品溶液。取11- 羰基-beta;- 乳香酸对照品适量，加乙醇制成每1 mL 含4 mu;g的溶液，作为参照溶液。取小儿化毒散(胶囊)取样量0.6 g，精密加入乙醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理20 min 后，放冷至室温，再称定重量，用乙醇补足减失重量，取上清液，用微孔滤膜(0.45 mu;m)滤过，取续滤液作为供试品溶液。取原药材，照处方量折算后，分别制成缺少乳香药材和没药药材的样品，按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。 　　2.1.3 专属性实验 　　取松香酸对照品溶液，参比溶液及阴性对照溶液各10 mu;L，按2.1.1 项下条件试验。结果表明阴性样品无干扰，专属性良好。 　　2.1.4 检测限 　　取松香酸对照品适量，配制成浓度为1.286 mu;g·mL-1 的对照品溶液。另取供试品0.6 g，乙醇定容至25 mL。上述两种溶液各取10 mu;L，加入液相色谱仪。得到对照品信噪比为8.7。根据以下公式计算得出仪器检出限(IDL)为4.43 ng，方法检出限(MDL)为18.4 mu;g·g-1。IDL=MDL= IDLtimes;K3QI/NVtimes;W式中V 为进样体积，K 为稀释倍数，W 为取样量，Q为进样量，I/N 为信噪比。 　　2 .1. 5 耐用性 　　用不同品牌十八烷基键合硅胶色谱柱3 根，对供试品溶液和对照品溶液测定，记录色谱图，结果样品色谱峰分离度，理论塔板数，均能满足要求，耐用性良好。 　　2.1.6 仪器精密度 　　取浓度为12.86 mu;g·mL-1 的松香酸对照品溶液2.1.1 项下条件连续5 次，由峰面积计算精密度，RSD 为1.2 %(n=5)，表明仪器精密度良好。 　　2.1.7 线性 　　精密量取松香酸对照品贮备液适量，加乙醇分别制为浓度为2.572、6.43、12.86、19.29、25.72、32.15 mu;g·mL-1 的溶液，分别取10 mu;L 注入液相色谱仪，得到色谱峰面积，以进样量为纵坐标，以峰面积为横坐标，绘制标准曲线。结果表明进样量在25.72~321.5 ng之间，呈良好的线性关系，回归方程为Y=0.038 1X+1.698 1，相关系数R2=0.999 7。 　　2.1.8 测定 　　取小儿化毒制剂样品，按“2.1.2”项下