双香贴膏中生物碱类的HPLC 指纹图谱和薄层色谱讨论.docVIP

双香贴膏中生物碱类的HPLC 指纹图谱和薄层色谱讨论 　　双香贴膏是我院临床使用多年的制剂，主要由马钱子、金耳环、水蛭、土鳖虫等药组方而成，主要功效为活血祛瘀、舒筋活络、行气止痛，临床可用于治疗跌打损伤、关节肿痛、筋脉拘挛、风湿痹痛等症。基于前期所建立的质量标准，本文将进一步对双香贴膏处方中马钱子和水蛭进行薄层色谱鉴别，并试图建立以士的宁和马钱子碱为特征峰的生物碱高效液相指纹图谱，以更好地评价双香贴膏的整体质量，更进一步提高该制剂的质量控制水平，更好的监控双香贴膏临床使用的安全性和有效性。 　　1 仪器与材料 　　1. 1 仪器设备 　　Sartorius BSA224S 型电子分析天平( 德国赛多利斯股份公司) ; KQ-100B 型超声波清洗器( 东莞市科桥超声波设备有限公司，功率100W，频率40kHZ) ; HH-4 型数显恒温水浴锅( 常州澳华仪器有限公司) ; GZY-P09-V 型国之源超纯水器( 湖南科尔顿水务有限公司) ; Dionex Ultimate 3000 型高效液相色谱仪( 美国赛默飞世尔科技有限公司) ; Goodlook-1000 型薄层色谱成像系统( 上海科哲生化科技有限公司) 。 　　1. 2 材料 　　士的宁( 中国食品药品检定研究院，批号:1110705-201307) 、马钱子碱( 中国食品药品检定研究院，批号: 110706-201306) 、马钱子( 中国食品药品检定研究院，批号: 121164-200302) 、水蛭( 中国食品药品检定研究院，批号:121061-200904) ; 12 批双香贴膏( 广州市正骨医院，批号:140604、141101、141102、141103、141201、141202、141203、141204、141205、141206、150301、150302) ; 乙腈( 色谱纯，美国J. B. Baker) ; 其他化学试剂均为分析纯。 　　2 实验方法与实验结果 　　2. 1 生物碱HPLC 指纹图谱研究 　　2. 1. 1 色谱条件: 色谱柱: Dionex C18( 250 times; 4. 6mm，5mu;m) ;流动相: 乙腈-0. 01mol·L - 1 庚烷磺酸钠与0. 02mol·L - 1 磷酸二氢钾等量混合溶液( 用10% 磷酸溶液调节pH 至2. 8 )( 21∶79) ; 流速: 0. 8mL·min - 1 ; 检测波长: 260nm。 　　2. 1. 2 供试品溶液的制备: 取双香贴膏5 片，去掉盖衬，再分别剪成小片状，置250mL 具塞锥形瓶中，加入100mL 0. 5% 盐酸溶液，加热，回流提取2h，过滤，滤液备用，滤渣用0. 5% 盐酸溶液洗涤2 次，1 次15mL，合并滤液，加浓氨试液调节pH至8 ～ 9，再转移至分液漏斗中，加入三氯甲烷萃取3 次，1次50mL，合并三氯甲烷萃取液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，定容至5mL，微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。 　　2. 1. 3 对照品溶液的制备: ①士的宁对照品溶液: 精密称取士的宁对照品适量，加甲醇制成浓度为1. 01mg·mL - 1 的士的宁对照品溶液。②马钱子碱对照品溶液: 精密称取马钱子碱对照品适量，加甲醇制成浓度为0. 8mu;g·mL - 1 的马钱子碱对照品溶液。 　　2. 1. 4 色谱系统适应性试验及特征峰的确定: 分别吸取士的宁对照品溶液1. 0mu;L、马钱子碱对照品溶液1. 0mu;L 及供试品溶液10mu;L，按2. 1. 1 项色谱条件依次进样后记录色谱图。以批号141206 样品色谱图为标准色谱图，取色谱图10 ～ 55min为研究段，峰形。通过90min 空白溶剂和90min 样品供试液色谱图辨别系统干扰峰并确定洗脱时间为55min。得到8 个共有峰，其中Rt = 20. 186min 为马钱子碱，Rt =24. 443min 为士的宁。 　　2. 1. 5 精密度试验: 取批号为141206 的同一供试品溶液，吸取10mu;L，连续进样5 次进行检测，所得图谱用MATLAB 相似度软件进行分析( 中位数法) ，结果各指纹图谱与其所得共有模式图谱的相似度分别为0. 9979、1. 0000、1. 0000、0. 9987、0. 9634，以士的宁为参照峰，计算得各共有色谱峰相对保留时间的RSD 为0. 20% ～ 0. 35%，相对峰面积的RSD 为0. 69%～ 2. 11%，表明仪器精密度良好。 　　2. 1. 6 重复性试验: 取同一批( 批号: 141206) 样品5 份，按“2. 1. 2”项下方法平行制备5 份供试品溶液，依次进样10mu;L检测，测得图谱用M