tgev含a、抗原位点s基因片断的真核表达.pdf

摘要 摘要 猪的一种以严重腹泻，呕吐和脱水为主要临床症状的高度接触性传染病。该病对2周龄以内 的仔猪具有高度致病性，致死率高达100％，是威胁养猪业发展的重要传染病。快速准确的 诊断和有效免疫预防是本病防治的主要内容。S基因所编码的s蛋白是唯一诱导机体产生中 和抗体的结构蛋白。因此，该基因的表达及表达产物的研究，对TGE特异性免疫预防及准 确诊断具有重要意义。 本研究根据已发表的TGEVS基因cDNA序列，利用Primer5、0软件设计弗合成了一对 TGEV S基因引物，通过PCR扩增出禽A、D位点的sl基因，将sl克隆到pMDl8-T载体上， C 将其与线性杆状病毒DNA Bac-N．Blue共转染St9醚虫细胞，通过三轮蚀斑筛选，获得了重 达系统中获得表达，表达的重组蛋白约为37kDa，光密度扫描对表达产物进行初步定量，表 明重组蛋白约为茵体总蛋白的8．3％。间接ELISA检测表明抗TGEV全血清可与目的蛋白发 生特异性反应，说明目的蛋白具有良好的反应原性，用目的蛋白免疫的血清可与全病毒发生 特异性反应，说明目的蛋白具有良好的免疫原性。 本研究将TGEVS基因在昆虫杆状表达系统中表达，为更深入地进行TGEV分子生物学 特性及TGEVS蛋白A，D抗原的基础性研究奠定了基础。 关键词：猪传染性胃肠炎病毒；Sl基因：S／9细胞；间接ELISA；杆状病毒表达系统 V II of of S EukaryoticExpressiongene A、DSitesofTGEV Abstract Procinetransmissible transmissible virus(TGEV)causes gastroenteritis gastroenteritis(TGE) inallkindsand of in under2weekold reach1 00％． agespigs．Particularly,itsmortalitypigs may TGEisa kindofacute infectiousdisease．Theclinicalmanifestationsof TGE highly typical consistof diarrhea for andlossofwater．Itisan diseasethe omitting,serious important of andeffectivevaccinationaremainmeansforTGE，S developmentpigs．Accuratediagnosis isthe structuretOinduceneutral the ofS is protein only protein antibody．Soexpressiongene forTGE． important Inthis of are