ndv hn基核酸疫苗的制备及其免疫效果的观察.pdf

摘要 自发现核酸疫苗以来，这种新型疫苗在畜禽疾病上的研究日益广泛，而且许 多研究结果已经显示出其巨大优势。由于对核酸疫苗的需求将逐渐扩大，但是目 前生产高纯度的核酸疫苗的成本很高，限制了核酸疫苗推广应用，尤其是在畜禽 疾病的研究和应用上更受到限制。本研究旨在探索小批量低成本制备高纯度核酸 I{N基因核酸疫苗的体内表达以 疫苗的方法和条件，并对本研究室所构建的NDV 及免疫效果进行检测。 首先，对用作核酸疫苗的重组质粒DNA提取过程进行了条件优化。对转化细 h，细菌生长达到最高密度。从而确定了细菌最佳的培养时间。 培养条件下培养14 然后利用最佳的培养时间大量扩增细菌，并分别在两种条件下对细菌进行裂解： 用常规碱裂解法裂解细菌时，组成裂解液中的三种成分分别以两种不同比例对细 的质粒有两种构像，三种溶液的比例为2：4：3时所提取的质粒有三种构像，说明 前者效果较好。接着用优化的裂解条件对培养的细菌进行裂解，再分别利用异丙 醇沉淀法和乙醇沉淀法沉淀裂解液中的质粒DNA。比较由这两种条件沉淀的质粒 DNA的琼脂糖凝胶电泳结果，发现它们的差异不显著，但异丙醇沉淀法操作比较 NaCl50mmol／LMOPs FF纯化质粒DNA时用O．05mol／L 较低；用Q．sepharose 范围较窄，而且吸附能力有限，出现蛋白质、RNA和DNA的洗脱峰相互重叠在 FF色谱法纯 但是其产量也比较低。综合比较，发现实验室条件下用Q-sepharose 化质粒DNA较为理想，所以本研究确定该法作为核酸疫苗的纯化方法。 其次，利用所纯化的NDv g／只)和sPF鸡(200ug／只)。小鼠分为5组，分别免疫2～3次，其中三组免疫核 酸疫苗，一组注射PBS对照，一组注射质粒载体，每次免疫间隔为2周。小鼠首 果表明用NDv 木斟≠置、导，ilf周童 ■全文公帮 结果表明首免两周后SPF鸡产生了针对NDV的抗体，在二免4周后抗体达到最高 值。 综上所述，本研究的实验结果表明，选择Q．sepharoseFF阴离子交换色谱纯 内均得到了表达，但是抗体的效价明显低于灭活疫苗组，因此在如何增强该核酸疫 苗在鸡体内免疫效果方面还需要进一步的改进和完善。 关键词：NDV，核酸疫苗，制备，免疫效果 Abstract DNAVaccinehasbeen studied0nanimalinfectious widely diseasesinceDNA Vaccinehasbeen haveshownthattheDNAvaccinehasa discoVerd．Manyexperiments lOtOf andits is thecostofthe adVantagesrequirement DNA enla蝎ingincreasingly，but VaccineisstilI limitits on veterinarianfields． Veryhigh，whichapplication，especially In0rdertOesta