h7亚型禽流感毒单克隆抗体的制备及elisa诊断方法的建立.pdf

摘要 avianinfluenzavirus， 本研究采用高致病性禽流感病毒(Highlypathogenic 强免疫后取脾细胞与SP2／0细胞融合，用血凝抑制试验(HI)方法检测筛选，阳性细胞克隆经有 轻链都为k链，经检测具有良好的特异性。采用纯化的HPAIV 毒株作为免疫原，灭活后加入弗氏完全佐剂和不完全佐剂制成疫苗多次免疫山羊，获得抗H7 亚型禽流感的高免羊血清。 用羊血清作为捕获抗体，H7亚型特异性单克隆抗体为检测抗体，建立了检测H7亚型高致 病性禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法．通过对各步反应条件进行优化，获得的最佳工作条 1．5h，酶标抗体作用时间1．5h。 · 毒以及其他15个}IA亚型禽流感标准病毒株进行交叉反应性试验，结果表明：建立的H7亚型高致 病性禽流感抗原捕捉ELISA方法和其他禽类病毒以及其他亚型禽流感病毒均没有明显的交叉反 应性，说明该方法对H7亚型高致病性禽流感病毒具有很好的特异性。 与血凝试验(HA)和鸡胚接种试验相比，本实验建立的抗原捕获ELISA方法较姒敏感2倍以上。 但不如鸡胚接种试验敏感。 利用优化的ELISA反应条件对人工感染的临床样本进行检测，通过对脾脏，肾脏、心脏、肺 脏等多份阴阳性样本的检测最终确定以心脏作为临床检测的靶器官，并将0．099(0仇一)作为脏 器的阴阳性判定标准。 将试验用的各种试剂及包被的反应板组装成试剂盒，同时保存于室温、4℃和一20℃，定期 进行检测，结果表明：试剂盒在室温保存时极不稳定，保存期限很短，4C和-20℃条件下都可 以保存3个月以上。 关键词特异性单克隆抗体；H7亚犁高致病性禽流感病毒：抗原捕获ELISA Vl ofmonoclonaland Deverlopment antibodyantigencapture ELISAfor detectionofH7 avianInfluenzaVirus subtype Abstract hthis cellstrainswere exeriment，several fusionofSP2，0mouse hybridoma d“elopedby cellswith cellsisolated myeloma spleen fromaBALB／Cmousewhichwasimmunizedwiththe avianinfluenza McAb purifiedhiglllypathogenic virus(AIV)A／FPV／Rostock／34017NIXFPv)．Two cellstrainsweredetermined and7F6．The ofHA byhemagglutinin inhibition饵I)：6H4subtypes McAbs to and ofMcAbsare k thestrains．BothofMcAbshad belongIgG2algG2b；Both good the sernmWasachieved forthreetimes sp