ibd的rt-cr快速诊断方法的建立及安徽超强毒株的分离鉴定.pdf

摘 要 急rE、高度接触性、杀淋巴细胞性的传染病。该病能引起鸡群免疫抑制，增加鸡群埘 j0’l_传染病的易感性，同时二F扰其它疫苗的免疫效果，因而使养鸡业蒙受重大的经济 损失。近年来由于IBDV超强毒株和变异毒株的出现，导致IBD的发生和流行呈现 ．j：升趋势。因此，本研究依据已发表的IBDV基因组序列，在其VP5和VP2重叠隧 设计合成一对引物，建立直接从病料组织中检测IBDV的RT-PCR方法，该方法快速 、敏感，特异，为]BD的临床诊断提供一种更为实用的技术。基于IBD在我省免疫 鸡群，”频繁发生，有时星爆发性流行，导致鸡群大批量死亡，而我省在]BD方面的 研究欠缺，本课题选取了来自安徽省RT-PCR星IBDV阳性的三份法氏囊病料(肿大 、…l缸)进行病原分离后，试图从分离株致病性和VP2高变区结构上来探明其原因。 首先，参考已发表的传染性法氏囊病病毒(IBDV各致病型毒株的序列，在其 的检铡，均能扩增出222bp的目的片段，而对鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒 、鸡马立克氏病毒及大肠杆菌均没有扩增到任何片段。将经典毒株(B87)的eDNA 作不同倍数稀释后分别进行PCR扩增，稀释至100倍，即5龟病毒的eDNA，仍可以 疑似IBD法氏囊病料检测进行比较，检出率分别达100％和92％。对AGP阴性病料 SZl和FYl采用鸡胚绒毛尿囊膜及鸡胚成纤维细胞接融和鸡体攻毒进彳亍IBDV瘸熙i 方法对死亡鸡法氏囊及鸡胫尿囊液进行检测，显示IBDV阳性，病料FYI对鸡体、 鸡胚及鸡胚成纤维细胞均无致病性，应用RT-PCR方法对存活鸡法氏囊及鸡胚尿囊液 进行检测，显示IBDV阴性。 。阿的病料悬液(CH、JG、QJ)，通过鸡胚接种、电镜检查等方法分离鉴定了三株纯净 小、浮数致死量测定，均能引起4周龄鸡100％发病，死亡率分别达92％、83％、67％， 以及法氏囊呈紫葡萄状、胸腺萎缩和骨髓脂肪化等超强毒株的特征性病变；鸡胚半数 4／0。2ml。】04 敏化量分别达】0“8／o．2ml、10q 6／0，2ml。 j刊{j_获得的基因片段分别插入到pMDl8--T载体中构建了重组质粒，随后对这些旗 酬片段进行了序列测定和序列比较分析。结果显示：三个分离株在249和254位的氨 螭酸均分别为Q和G，而非K和S，这是抗原性不发生变异的保证。七肽区均保持 株与CH03株同源性最高，达99．3％，进化树的分析中，二者也处于同一个基因群， 系较远。与参考的经典毒株、变异毒株和致弱株相比，分离株与超强参考株同源性较 高，为953％-99．5％，且与其处于同一大分支，具有较近的亲缘关系。 RT-PCR方法快速、特异、敏感，具有在IBD临床诊断中推广使用的价值：通过分离 株的致病性和VP2高变区的序列分析。首次证实了安徽省有IBDV超强毒株存在， 这为IBDV毒力的研究积累了资料，同时为我省IBD的防镥0提供了科学的理论依据。 关键词：IBD，RT-PCR，快速诊断，超强毒株，分离鉴定 Abstract Infeetiousbursal an infectiousbursaldiseasevirusis by aeule， disease(roD)caused highly disease chickens．Thediseasehasbeen infectious，lymphocidalofyoung recognized iIl all areasworldwideandisconsidered major vii’tually poultryproducing economically becauseofits toinducea inchi