ibv小囊膜蛋的原核表达及序列分析.pdfVIP

摘要 摘要 鸡传染性支气管炎(Infecaous Bronchius Virus，IB、，)引起的，该病毒属于冠状病毒科冠状病毒属，是有囊膜的单股正链RNA’ 病毒，也是至今为止发现的最大的RNA病毒。该病毒编码四种结构蛋白(纤突蛋自S、膜蛋 白M、核蛋白N以及小囊膜蛋白E)，长期以来人们对s、M、N蛋白研究的较多，而对于小 囊膜蛋白E的研究较少，国内更几乎为空白． E蛋白是由mRNA3的第三个ORF编码的．分子量为12．4KD，其与M蛋白协同作用， 形成腐毒样颗粒(Vuus．1ikeParticle，VLP)，后者在IBV的粘膜免疫中发挥功能。在病毒的 复制过程中，E蛋白参与VLP形成和病毒出芽，近来又发现E蛋白在IBV感染后期的细胞 中非常丰富，推测该蛋白与细胞凋亡有关。 本研究旨在将IBV M41株的E基因克隆到表达载体pGEX-eP一1中，将其转化至大肠杆 的GST标签蛋白免疫小鼠，制得多克隆抗血清。用制备的血清来检测表达的GST-E融合蛋 白及其活性，用以探索IBVE基因在大肠杆菌原核表达系统中的高效表达。另外用表达的 GST-E融合蛋白应用Western E蛋白抗体，用 Blotting来检测IBV感染SPF鸡体内的抗IBV 以探索它在病毒检测中的应用前景。同时选取了不同血清型的mv毒株的E蛋白碱基和氨基 酸序列进行对比，为日后对IBVE蛋白的深入研究提供前提条件。另外，对不同类型的冠状 病毒的E蛋白碱基和氨基酸序列进行比较，以期分析各群冠状病毒的同源性，为冠状病毒E 蛋白的研究提供线索。 本研究结果：成功构建侧—6P．1-E表达载体后，用IFIX3诱导重组载体转化的BL21 量约为12．4KD)已与谷胱甘肽硫转移酶(GST,大小约为26KD)成功的融合并表达。用自制的 GST多克隆抗血清对重组载体表达产物进行Western blotting活性检测，在38．4KD处有反应 内的抗IBVE蛋白抗体，发现IBV病毒感染后5天就可检测到抗E蛋白的抗体，lO．14天仍 可检测到该抗体，直到第2l天无法检测到抗E蛋白的抗体。对各型IBVE蛋白基因碱基和氨 基酸序列进行分析，发现，虽然各1BV有组织嗜性的差异，但是其E蛋白的序列还是比较保 守；对不同冠状病毒毒株的碱基和序列分析表明，冠状病毒的基因型和它的抗原性分型相同， 都是将现有冠状病毒分成四个组，SARS作为新型的冠状病毒，单独成群。IBV和TCoV与 其它的冠状病毒的同源性很低。 关键词：传染性支气管炎病毒；E基因；原核表达；活性检测； 序列分析 V E IBV ofGeneof and ontheE Expression Analysis GenesofDifferentIBVandDifferentCoronavimss Abstract AvainInfectious caused bronehitls bronehi血(m)istheinfectious by virus(ⅢV)which belongstotheColonavlrlE．Itis Coronavinm．田lisvirushas protein(s)’malnxovD， folproteins，which勰sipkeprotem the useddomuchmole Onthe necleocapsidprotein(N)andenvelopeprotein饵)．We stay