ibdv-vp基因部分片段的克隆与表达及其鉴定.pdf

中文摘要 传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病毒(IBDv)引起鸡和火鸡的一种急性、高 度接触性传染病。自1957年Cosgrove首次报道该病以来，便出现世界性的流行特点， 相继流行于三十多个国家，尤其在养禽业发达的地区，1979年传入我国北京、广州、 上海等地区，随后发生于全国各地，造成了严重的经济损失，尽管我国投入了大量的 人力、物力，采取了控制与扑灭该病的措施，但由于超强毒株和变异株的出现，传染 性法氏囊病迄今仍然是威胁养禽业的头号传染病。 传染性法氏囊病毒主要侵害3．12周龄的雏鸡和青年鸡，破坏法氏囊中的B淋巴 细胞，引起免疫抑制，因此，很容易和其它疾病联合感染，出现亚临床症状，给临床 诊断带来不便。 为了建立一个准确快速的诊断方法，分析我国目前使用的疫苗株的抗原基因是否 原决定区域的基因，构建了该基因的重组质粒，并且成功表达了VP2基因的部分片段。 首先，根据GenBank中已登录的传染性法氏囊病毒VP2基因序列和在前人研究 理盐水稀释液为毒种，SPF鸡胚接种法增殖IBDV病毒，再以在鸡胚上已盲传三代的 尿囊液接种鸡胚成纤维细胞，分别以尿囊液和细胞液离心后的沉淀物为材料，采用 液离心后的沉淀物提取的病毒总RNA均可作为RT-PCR的模板，均能够扩增出大小 录序列片段中的酶切位点，经单酶切鉴定后，将其插入到质粒载体PET-32a上，转化 97．3％、99．3％、和94．8％，这表明本实验已成功地扩增了目的基因，为建立检测IBDV 的RT-PCR方法奠定基础。 其次，根据GenBank中登录的传染性法氏囊病毒基因序列及原核表达质粒 点及其保护碱基。以已构建的重组质粒为模板，Pl、P3分别为上下游引物，扩增504bp 菌DH5ct，经菌液PCR筛选阳性克隆、双酶切鉴定后，将抽提的重组质粒转入大肠杆 一致。 综上所述，本研究用两种方法增殖了传染性法氏囊病毒，克隆了包括中和抗原表 立和基因工程疫苗的制备都打下了一定的实验基础。 关键词：IBDVVP2基因克隆表达 II Abstract bursal acuteand Infectious contactable disease(IBD)，all high contagiousdisease，is Infectiousbursaldisease Was caused first in virus(IBDV)．It by reportedbyCosgrove1957， thencharacterizedtheworld outbrokeinover by popularity，and thirtycountries， inthe areaof brokeoutin especiallydeveloped poultry-producing．it BeiJing、 ofOUr in1979andbecame allover GuangZhou、ShangHaicountry the popular country after economic the much that，w