h5n1亚型禽感病毒单克隆抗体的制备与鉴定.pdfVIP

摘要 摘 要 I／00 与SP2／0细胞融合，分别用全病毒包被ELISA方法、重组核蛋白(NP)表达蛋自包被 ELISA方法和血凝抑制试验(HI)方法检测筛选，阳性细胞克隆经有限稀释法克隆培 腹水效价测定显示三株HA特异性MeAb效价(HI效价)依次为：2”、2”、 计数分析各株杂交瘤细胞的平均染色体数均在97．108之间，符合脾细胞与SP2／0细胞染 色体数之和。抗体亚类检测结果表明三株HA特异性McAbs类依次为IgGl、 McAb均具有良好酸、碱和熟稳定性。 三株具有HI活性的H5亚型特异性McAb与其他H5亚型AIV分离株的特异反应 和中和实验表明，FGl0和CBl2对所选择的毒株全部具有HI活性和中和活性，而 原位点。有趣的是，DD7同样对DKSH／3502具有很高的HI效价，但在鸡胚中和实验中 却不表现中和活性。由以上结果可以得出，AIV中具有血凝活性的抗原位点与病毒的中 和位点不完全等同。 三株H5亚型HA特异姓McAb与其他各HA亚型鑫漉感标准毒之阅的特异性反应 实验及免疫荧光(IFA)实验结果表明．三株McAbs与其他任何HA亚型禽流感病毒均 不具有交叉反应，具有良好的亚型特异性。HA亚型特异性单克隆抗体的制备成功为 H5亚型AIV的诊断与鉴别诊断奠定了物质基础。 关键词：单克隆抗体；禽流感；H5亚型；HI Abstract Abstract Inthis eelIstrainswere fusionofSP2／0 experiment．severalhybridoma developedby wasimmunized mouse which cellswith cellsisolatedfromaBALB／Cmouse myeloma spleen withthe AIV McAbcellstrainsweredetermined DZJ／1100Three purified byhemagglutinin indirect weredetermined CBl2．T~w0McAbeellstrains inhibition(HI)：DD7，FGl0，and by coated McAbcellstrainsweredetermined ELlSA with virus：EC6．EA3．TwO purified by indirect titersofascites：the ELlSAcoatedwithrecombinantNP ofAIV：4H1．4H7．The protein McAbs McAbs ofHA(HI ofNP(ELISA titers)were：2