h5n1亚型禽感病毒ns1基因的克隆与表达及elisa检测方法的初步建立.pdf

摘要 禽流感(AI)是由A型流感病毒引起禽类的一种急性、烈性传染病，它的流行 与爆发给养禽业造成了巨大的经济损失。而防制禽流感的主要措施是使用禽流感灭活 疫苗，但免疫禽群和野毒感染禽群同样会产生较高的抗体，所以如何区分免疫鸡群和 感染鸡群成为当前面临的一大难题。 选出阳性克隆，测序鉴定。结果表明，所得到的阳性克隆质粒含有NSl基因，是正 确插入到载体中的，通过核苷酸及其所推导的氨基酸序列比较，与GenBank上参考 毒株的同源性分别为95．2％～99．7％和92．2％～98．7％． 感染的发病鸡血清发生反应，证明该表达产物具有良好的反应原性。 在优化了表达条件后，对重组蛋白进行了大量表达并纯化。以纯化的重组蛋白作 为包被抗原建立了间接酶联免疫吸附试验(EuSA)检测方法，并对人工感染和疫苗 免疫的鸡群进行检测。结果显示。该方法能检测到AI自然感染鸡所产生的抗体，而 不能检测到灭活疫苗免疫鸡血清中的抗体。因此，NSl蛋白可作为一种鉴别诊断标记， 区分野毒感染和灭活疫苗免疫鸡群，但不区分亚型，具有A型特异性。 一种快速、特异的鉴别诊断方法，为进一步组装试剂盒奠定了基础，该方法的应用将 为禽流感的早期诊断和控制提供行之有效的技术支持。 关键词：HSNl亚型禽流感病毒；NSl基因；克隆；表达；包涵体；酶联免疫吸附试 验 and oftheNonstructuralGene theHSNl CloningExpression One烈S1)ofSubtype AvianInfluenzaVirusandtheEstablishmentofEUSA Author：．LiOian Medicine Speciality：PreventiveVeterinary XuanProfessor．Li Professor．Gao Supervisor：Associate Mingyi Abstract Avirus． Avian oneofthefatalinfectiousdiseasescausedinfluenza Influenza㈣is by The of越hasculminatedintremendouseconomiclossesin is epidemic poultryindustry．It thatacommonmeasureAIistovaccinate the infected known against chicken，but poultry AIV can at AI andvaccinatedboth howtodifferentiate producthighantibody．Sopresent vaccinatedandinfectedchickenisasignificantopenproblem． One of Was and tothe of