h5亚型禽流感毒血凝素蛋白抗原性差异的研究.pdf

摘 要 高致病力H5N1亚型禽流感的暴发不仅给世界养禽业造成巨大打击，而且给人类健康带来严 重威胁，对于该病的防制具有重要的公共卫生学意义。疫苗免疫接种是防制高致病性H5NI弧型 禽流感的重要手段，但禽流感病毒像所有的RNA病毒一样在传播过程中非常容易发生变异，使 疫苗株与感染的病毒之间抗原差异较大而不能有效保护家禽。已知禽流感病毒的毒力和抗原性与 其HA蛋白有密切关系，因此要控制禽流感首先要对毒株之间HA抗原性的差异进行研究。 为此，本研究选用了4个不同年代、不同分离地点的毒株(CC毒株是04年分离于广东地区、 GD毒株是96年分离于广东地区、OVV毒株是04年分离于东北地区、YC毒株是05年分离于东 到pFastBacHTA杆状病毒转座载体上，经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组载体，将其转化 蛋白质电泳，免疫印迹法、血凝试验和血凝抑制试验分析表明：分子量约63Kd重组血凝素蛋白 在sf9昆虫细胞中实现了高效表达。具有良好的血凝话性；而且其血凝活性能够被H5NI禽流感 病毒高免血清所抑制，说明表达的重组蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性。 然后将所表达4种HA蛋白定量，用佐剂乳化后制成禽流感基因工程亚单位疫苗分别免疫l 组3周龄SPF鸡。并在免疫后!-5周和攻毒后3周分别翅静脉采血并分离血清，将采集的血清分 别用H5亚型禽流感病毒的不同毒株作为抗原进行交叉血凝抑制反应(HI)和中和试验，来检测 抗体与不同毒株之间的交叉血凝抑制价和中和病毒的能力，并用A／Goose／HU／QFY／04毒株作攻 毒保护试验以对这4株禽流感病毒的HA蛋白进行比较，从免疫水平上了解血凝素基因的差异： 实验结果显示各组SPF鸡对强毒株的攻毒保护、排毒情况及对不同分离株的血凝抑制价有显著差 别，GD蛋白免疫组对4个毒株的血凝抑制价最低普遍在临界保护值以下，并且对QFY毒株的攻 击不能100％保护并有严重的排毒现象。CC和YC蛋白免疫组对QFY毒株的攻击能够全保护， 但也有一定量的排毒。只有QFY蛋白免疫组对同源病毒的攻击产生非常好的保护力也没有排毒 现象，而且对4种不同抗原都有较高的血凝抑制效价；从结果中可以看出96年分离的GD毒株 与04／05年分离的几个毒株抗原性差异很大。CC和YC毒株的抗原性与QFY毒株也不相同，虽 然能够有效保护但也会捧毒。 关键词：禽流感，血凝索基因。杆状病毒表达，抗原性，H5N1亚型 ABSTRACT avianinfluenza ale foroneofthe Higlllypathogenic viruses(HPAI)ofH5NIsubtyperesponsible most diseasesindomestic viruseshaveled loss economicaltofarmsin devastating poultries．The huge thewhole H5NIavianinfluenzaalsomadea alertto world．Highly humanhealth． pathogenic pandemic hasbeen tobe Vaccination au∞mltoolfortheavianinfluenzacontr01．butAlV∞aRNAvirus proved its differencebetweenVaccinationandvirusstrainistoomuchto changedantigenfagtly．The antigenic iswell—known that and characteristicsofAIVis relatedtoi