h9n2亚型av ha2基因在重组杆状病毒和毕赤酵母菌中的表达.pdf

摘要 摘要 禽流感(AivanInfluenza，AI)是由正粘病毒科A璀流感病毒引起的传染性疚病综合症。 低致病力禽流感常引起呼吸道症状，产蛋量下降。1994年首次报道H9N2耵型AIV在中国流 行。并且已成为中国现有AIV的主要亚型。近几年发现，H9N2哑型AIV不仅感染禽类，还 感染猪和人。因此，开展对禽流感病毒H9N2亚型的研究，加强对H9N2弧璎AIV的监控， 不仅在病毒学、兽医学等学科上有重要的学术意义，而其公共卫生等方面也具有重人的字十会 意义。 细胞杆状病毒表达系统的质粒图谱。设计一对引物，以本实验室所保存的pMDl8．T-HA2阳 性质粒为模扳扩增出HA2基因，命名为BHA2。将其克隆至昆虫杆状病毒转移载体 I和Sal pBlueBaeHis2A的BamH 化该重组质粒并与杆状病毒共转染Sf9昆虫细胞，5d后获得重组病毒，名为P1。将经过3 轮噬斑筛选纯化P1接种Sf9细胞大量繁殖后收获，PCR鉴定结果为完全纯化的病毒命名为 果表明其可与鸡抗H9N2亚型血清发生特异性抗原反应，而与H5和H7Ⅱ型抗血清间无交叉 反应。 同时参照毕赤酵母表达系统pPIC9K质粒图谱设计引物，扩增出HA2基因，命名为 I和NotI之间的多克隆位点上构建 YHA2。将其克隆至毕赤酵母转移载体pPIC9K的SnaB 上，利用MD平板筛选His*阳性克隆；用含不同浓度G418-YPD平板筛选高拷贝转化子；利 用PCR法筛选Mm+阳性克隆。将筛选到的高拷贝进行BMMY摇瓶培养，甲醇诱导表达重组 为35KD，较理论值27KU大，由于HA2存在糖基化位点，分析为糖基化所致。 HA2基因在昆虫细胞杆状病毒表达系统和毕赤酵母表达系统成功获得了表达，，f且分 定了基础。 关键词 禽流感病毒：HA基因；HA2基因：重组杆状病毒；毕赤酵母 AvianInfluenzaVirusH9N2 HA2 SubtypeHemagglutinin inRecombinantBaculovirusand PichiaPastoris Expressed Yeast Abstraet influenza callsed influenza Avian (AI)iSby Aavian virus．amemberof type influenzawithlowvirulenceischaracterized and Orthomyxoviridae．Avian byrespiratorysymptom has amain inChina itwas low influenzaH9N2 been since productirty．Avian subtype subtype in gallinfect andhuman itisof 1994，which reported flow,pig being．So greatinterest幻study AvianinfluenzaH9N2 inmolecularlevelnot in of and virologyveterinary subtype on