产漆酶半知真菌Myrothecium verrucaria NF08菌株的分离及产酶研究.pdfVIP

第5l卷第1期 林 业 科 学 V01．51，No．1 201 SCIENTIASILVAESINICAE 015 5年1月 Jan．，2 doi：10．11707／j．1001-7488 NF一08 verrucaria 产漆酶半知真菌Myrothecium 菌株的分离及产酶研究术 高冬妮1’2 范晓旭1’2 赵 丹1’2 (1．黑龙江大学生命科学学院微生物省高校重点实验室 哈尔滨150080； 2．农业微生物技术教育部工程研究中心 哈尔滨150500) 摘要： 【目的】采集凉水国家级自然保护区原始森林土壤样品，分离产漆酶真菌并优化产酶条件，旨在开发产 漆酶半知真菌种质资源，提高漆酶产量，为微生物漆酶扩大生产提供菌种资源和条件参数。【方法】以木质素磺酸 钠为唯一碳源的无机盐培养基为富集培养基，在愈创木酚一PDA选择性平板上分离产漆酶真菌。利用ABTS[2， 27一连氮一双(3一乙基苯并噻唑一6一磺酸)]和SGZ[4一羟基一3，5一二甲氧基一苯甲醛连氮，即丁香醛联氮] 显色反应初筛和摇瓶发酵复筛。确定供试菌株后，利用形态观察结合rDNA—ITS序列分析技术，将菌株鉴定至种。 以ABTS法测定供试菌发酵液漆酶活性，以Lowry法测定发酵液总蛋白含量。在考察供试菌株生长、产酶及胞外蛋 白总量动态变化基础上，通过单因素试验，研究碳源种类及浓度、氮源种类及浓度、培养基起始pH、装液量、接种量 及底物诱导对菌株产漆酶的影响，获得菌株产酶最适培养基组分和培养条件参数。【结果】获得1株发酵周期短、 孢漆斑菌。该菌株在液体发酵培养基中产漆酶活性与菌丝生长和胞外蛋白总量基本同步，发酵第6天达到酶活峰 值9．28U·mL～。疣孢漆斑菌NF-08产酶最佳碳、氮源分别为4．O％葡萄糖和3．5％蛋白胨，培养基初始pH7．0。 最适装液量60mL·(250mL)～，最适接种量4％，最适培养温度和摇床转速分别为30℃和140r·min～。没食子 酸、阿魏酸和单宁酸显著诱导疣孢漆斑菌NF-08漆酶活性的产生，以没食子酸效果最好。经过培养基组分和培养 条件优化以及底物诱导，疣孢漆斑菌NF-08产酶水平达到16．82U·mL～，比优化前提高了81．25％。【结论】建立 环境样品中产漆酶真菌的分离、纯化及筛选方法，获得了一株发酵周期短、产漆酶活力高的半知真菌疣孢漆斑菌 NF-08。该菌株经单因素试验产酶条件优化效果明显，酶活水平提高显著，可为微生物发酵产漆酶提供新的菌株资 源。在微生物发酵漆酶工业生产中具有应用潜力。后续对疣孢漆斑菌NF-08漆酶产生、性质及基因表达调控的深入 研究，将有助于了解漆酶在半知真菌生活史中的作用及生态学功能，同时拓展半知真菌漆酶的应用领域。 关键词： 半知菌；疣孢漆斑菌；漆酶；产酶条件 中图分类号：$763．15 文献标识码：A 文章编号：1001—7488(2015)01—0080—08 Isolationofa verrucariaNF-08 DeuteromyceteFungusMyrothecium andItsLaccaseProduction Gao ZhaoDanl·2 FanXiaoxul，2 Dongnil一