CIK联合紫杉醇对胃癌细胞株SGC-7901的杀伤作用观察.pdfVIP

山东医药 2009年第49卷第42期 CIK联合紫杉醇对 胃癌细胞株 SCC一7901的杀伤作用观察 周文杰，蒋敬庭，李 敏，邓海峰，徐 斌，吴昌平 (苏州大学附属第三医院，江苏常州213003) 摘要：目的 观察由细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合紫杉醇对胃癌细胞株SGC-7901的杀伤作用。方法 将健康人外周血单核细胞(PBMC)在体外诱导形成 CIK。取 SGC-7901，分别加入CIK、紫杉醇、CIK+紫杉醇培养， 采用MTr法分别检测各组细胞的杀伤率。结果 5 g／rnl的紫杉醇作用于SGC-7901细胞4h后 ，分~lJlJ／tl入效靶比 为 10：1和20：1的CIK细胞作用24h，SGC-7901杀伤效率明显高于单用紫杉醇及单用 CIK时的杀伤率，P均 0．O1。结论 CIK联合紫杉醇对 胃癌细胞株SCC-7901的杀伤作用明显增强。 关键词：胃肿瘤；胃癌细胞；细胞因子诱导杀伤细胞；紫杉醇 中图分类号：11735．2 文献标志码：B 文章编号：1002-266X(2009)42-0070-02 近年来，生物治疗已成恶性肿瘤治疗的第四大 使效靶比为5：1、10：1、20：1、40：1，同时设靶细胞及 模式。研究发现，细胞因子诱导的杀伤细胞 (CIK) 效应细胞对照孔，每组设 6个复孔，置 37℃、5％ 对 胃癌细胞有明显的杀伤效应…，但CIK联合化疗 CO 孵箱中培养，24、48h时每孔加MTr20 l，继续 药物对 胃癌细胞的作用报道很少。2008年 7月 1 培养4h，平板离心机上离心 1500r／rain，5min，弃 日～12月30日，我们观察了CIK联合紫杉醇对 胃 上清，每孔加 DMSO各 150Ixl，振荡 10min。将96 癌细胞的杀伤作用。现报告如下。 孑L板置于酶联免疫检测仪。检测492nm波长处的 1 材料与方法 吸光度值 (A值)。按如下公式计算 SGC-7901的杀 1．．1 试剂及细胞株 基 因重组人 IL-2，鼠抗人 伤率：SGC-7901杀伤率=[1一(实验孔 A值 一效应 CD，McAb，重组人 白细胞介素 1 (rhIL一1d)，重组人 细胞孔A值)／靶细胞孔A值])×100％。 干扰素 (IFN一^y)，淋巴细胞分离液，RPMI1640，二 1．3．2 紫杉醇对 SGC-7901的杀伤实验 取 1．0× 甲基亚砜 (DMSO)，MTr，胰蛋 白酶 (Tripsin)，紫杉 10／ml的SGC-7901细胞 100 l置96孔培养板(实 醇。SGC-790l胃癌细胞株。 验孔)，贴壁 24h后分别加入 2．5、5、10、25和 50 1．2 CIK的制备 用淋巴细胞分离液、经Ficoll密 g／ml的紫杉醇，设未加紫杉醇的对照孔，每组设6 度梯度离心法提取 1O例 0型健康人的外周血单个 个复孔，培养 24、48h时加 MTr，其余步骤 同 核细胞(PBMC)1X10 ～2×10个，用RPMI1640完 “1．3．1”。SGC-7901杀伤率=(1一实验孔 A值／对 全培养液调整细胞密度为2×10／ml，开始时加入 照孔A值)X100％ 。 1．5×10。U／L的IFN．^y，37℃、5％CO2培养24h后 1．3．3 CIK联合紫杉醇对SGC-7901的杀伤实验 加入 100IXg／L的 CDMcAb、5．0X10’U／L的 IL-2 取 1．0×10／ml的SGC-7901细胞 100 置96孔培 和 1．0X10／L的IL．1，以后每2—3d添加 1次培 养板(实验孔)，贴壁24h后，先加入紫杉醇5 g／ 养液，同时补加 IL-2，调整细胞浓度至 1．0×10。／ml。 rrIl，作用4h后，加入CIK，效靶比为 10：1和20：1， 分别于培养的第 1、7、14、21、28天收集细胞，以间接 同时设靶细胞及效应细胞对照孔，继续培养24h时 免疫荧光抗体染色，流式细胞仪分析，co；cD