Oct-4在精原干细胞定向诱导分化中甲基化的研究.pdfVIP

2013年 4月 农 垦 医 学 ADr．2013 第 35卷 第 2期 JournalofNongkenMedicine Vo1．35 No．2 · 论著 · Oct-4在精原干细胞定向诱导分化中甲基化的研究 王 菊 王海燕 周宗瑶 (1．石河子大学医学院组织胚胎学教研室，新疆石河子，832002； 2．新疆乌鲁木齐市第一人民医院儿三科，乌鲁木齐，830011) 【摘要】目的：检测Oct-4在小鼠精原干细胞(SpermatogonialStemCells，SSCs)诱导分化前后的表达及甲基化状 态。方法：体外分离培养小鼠SSCs，用干细胞因子(stemcellfactor，SCF)诱导其向精母细胞方向分化，通过间接免疫 荧光染色和RT—PCR，检测Oct-4在小鼠SSCs诱导分化前后的表达；运用甲基化特异性PCR检测Oct-4在小 鼠SSCs 诱导分化前和分化后2d的甲基化状态。结果：间接免疫荧光染色和RT—PCR显示，Oct-4在小鼠SSCs诱导前有表达， 诱导2d后表达下降；甲基化特异性 PCR显示 ，Oct-4在小鼠SSCs诱导前未发生甲基化改变，诱导2d后检测到其甲基 化状态。结论：Oct~基因在小鼠sSCs定向诱导分化中的表达下调可能是其启动子区Cr,G岛甲基化的缘故。 【关键词】Oct一4；精原干细胞；分化；甲基化 中图分类号：Q75 文献标识码：A Methylation ofOct-4geneintheSpermatogonialStem Cellsof MouseduringDifferentiationinVitro WANGJu ，WANGHai．yan ，ZHOUZong—yao (1．DepartmentofHistologyandEmbryoloyg，ShiheziUniversitySschoolofMmedicine，XinjiangShihezi，832002； 2．UrumqiCityFirstPeoplesHospitalofChildrenThreeSubjects，Urumqi，830011) 【Abstract】Objective：DetectOct-4expressionandthemethylationleveinSSCsofmouseinduceddifferentiationin vitro．Methods：Themousespermatogoniumstemcells(SSCs)wereseparatedandpurified，theninducedwithstemcellfac— tots(SCF)todifferentiationinvitro．Theimmnofluorescenccstaining，RT-PCRandmethylation—sensitivePCRtechniques wereuesdtodetectOct-4expressionandthemethylationlevelinmouseSSCsinduced．Results：Theresultsshowedthatthe Oct-4 expressedinprimaryculturedmouseSSCs，thendecreased，andmchtylatedafterinductionfor2 days．Conclusions： ThemethylationofCPG islowedinOct-4genepromotermaycontributetothedown—regulatedexpressionofOct-4genein mouseSSCsinducde differentiation． K【eywords】Oct-4；Sspermatogonialstemcells；Differentiation；Methylation 干细胞从 自我更新状态向定向分化的转变过程