EGFP和CM-Dil示踪骨髓问充质干细胞构建组织工程骨的体内研究.pdfVIP

406 中国美容医学2012年3月第21卷第3期 ChineseJournalofAestheticMedicine．M ．0l_．!： · 论著 · EGFP和CM—Dil示踪骨髓问充质干细胞构建组织工程骨的体内研究 武京 谢方南，马慧雨，王 黔，曹谊林，肖苒 (北京协和医学院 ·中国医学科学院一整形外科医院研究中心 北京 100144) [摘要]目的：应用增强型绿色荧光蛋白(Enhancedgreenfluorescentprotein，EGFP)和CM—Di1标记技术，观察组织工程骨在 体内形成过程中种子细胞的变化和转归。方法：分别用EGFP慢病毒表达和cM—Di1染料的方法标记比格犬骨髓间充质干细胞 (Bonemesenchvma1stemce1ls，BMSCs)，MTT法检测标记细胞的体外增殖能力。BMSCs接种珊瑚支架体外成骨诱导7天后，将 未标记组、EGFP组和CM—Oil组分别植入裸鼠背部皮下，空白支架作为阴性对照。术后 4、8、12周取材，HE染色观察成骨情况， EGFP组采用GFP免疫组化、CM—Di1组冰冻切片荧光显微镜下示踪 BMSCs在体内的变化。结果：两种标记技术能高效标记 BMSCs，标记前后细胞的体外增殖无显著性差异( 0．05)。细胞一支架复合物植入体内12周后有新生骨形成，标记细胞数量随 时间延长而逐渐减少，12周后仍显示有部分标记细胞存活。结论：EGFP和Ci—Di1可用于示踪组织工程种子细胞，通过示踪说明 BMSCs在体内组织工程骨成骨过程中发挥了重要作用。 [关键词]EGFP；CM—Dil；骨髓间充质干细胞；示踪；组织工程骨 [中图分类号]Q813．1 R318 [文献标识码]A [文章编号]1008—6455(2012)03—0406—04 TheinvivostudyoftissueengineeredboneconstructedwithEGFPandCM-DillabeledBMSCs wuding—guo，XlEFang—nan，MA Hui-yu，WANG Qian，CAOYi—lin，XIAO Ran (ResearchCenterofPlasticSurgeryHospital，ChineseAcademyofMedicalSciences，PekingUnionMedicalCollege， Beijing100144，China) Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofBMSCsinfabricatingtissueengineeringboneinvivousingEGFPand CM —Dillabelingtechnology Methods BMSCsisolated from Beagle Dogswere labeled using EGFP and CM—Dil separatelyandtheproliferationabilitieswereanalyzedbyMTTassay．BMSCswereseededontothecoralscaffoldsand culturedintheosteogenicmedium for7days．ThentheBMSCsC／oralconstructswere implanted into thenudemices subcutaneouslyThe constructs were divided into three grOups：UnlabeIed group，EGFP group，CM -Dilgroup．The specimens were collected respectively at4，8 and 12 weeks afterimplantation and tissue engineered bone was evaluatedbyHEstaining．TheseededBMSCsweretracedbyImmunOhistOchemistrystainingofGFPintheEGFPgroup and directlyobserved inthefrozensectionunde