食品卫生检测技术第04章.pptVIP

食品中农药及兽药残留的测定 （3）芽胞悬液用量的测定 把不同量的稀菌液加入检定用培养基中，按本法进行操作，0.25μg/mL的四环素参考浓度可产生15mm以上的清晰、完整的抑菌圈，选择出最适宜的芽胞悬液用量。一般为每100mL检定用培养基加入0.2～0.5mL稀菌液。 （4）检定用平板的制备 试验用平皿内预先铺有20mL检定培养基作为底层，将适量稀菌液（已于[6.（3）]中确定）加到溶化后冷却至55～60℃的检定用培养基中，混匀后往上述平皿内加入5mL作为菌层。前后摇动平皿，使菌层均匀覆盖于底层表面，置水平位置上，盖上陶瓷盖，待凝固后，每个平板的培养基表面放置6个小管，使小管在半径2.3cm的圆面上成60°角的间距。所用平板需当天准备。 食品中农药及兽药残留的测定 7.定量试验 　（1）标准曲线的制备 取3个检定用平板为一组，6个标准浓度需要六组，在该组每个检定用平板的3个间隔小管内注满一参考浓度液，在另3个小管内注满一标准浓度液，于37℃±1℃培养16h，然后测量参考浓度和标准浓度的抑菌圈直径，求得各自9个数值的平均值，并计算出各组内标准浓度与参考浓度抑菌圈直径平均值的差值F，以标准浓度C为纵坐标，以相应的F值为横坐标，在半对数坐标纸上绘制标准曲线。 食品中农药及兽药残留的测定 （2）样品测定 每份样品取3个检定用平板，在每个平板上3个间隔的小管内注满0.25μg/mL四环素参考浓度（或0.25μg/mL土霉素或0.05ug/mL金霉素，视所含抗生素种类而定），另3个小管内注满被检样液，于37℃±1℃培养16h，测量参考浓度和被检样液的抑菌圈直径，求得各自9个数值的平均值，并计算出被检样液与参考浓度抑菌圈直径平均值的差值Ft。 食品中农药及兽药残留的测定 8.定性试验 取层析用滤纸（7cm×22cm）均匀喷上0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH4.5），于空气中晾干、备用。在距滤纸底边2.5cm起始线上，分别滴加l0μL，2μg/mL四环素、土霉素及1μg/mL金霉素标准稀释液与定性试验样液，将滤纸挂于盛有展开剂[2.（7）]的层析缸中，以上行法展开，待溶剂前沿展至15cm处将滤纸取出，于空气中晾干，贴在事先加有60mL含有试验用菌菌层的长方形培养皿上，30min后移去滤纸，在37℃±1℃培养16h，由抑菌圈测得比移值，以确定被检样品中所含四环素族抗生素的种类。 食品中农药及兽药残留的测定 9.样品中四环素族抗生素残留量计算 根据被检样液与参考浓度抑菌圈直径平均值的差值Ft，从该种抗生素标准曲线上查出。抗生素的浓度ct（μg/mL），样品中若同时存在两种以上四环素族抗生素时，除了四环素、金霉素共存以金霉素表示结果外，其余情况均以土霉素表示结果。样品中四环素族抗生素残留量按下式进行计算： 　　 　　式中 X——样品中四环素族抗生素残留量，mg/kg； ct——检定用样液中四环素族抗生素的浓度，μg/mL； V——待检定样液的体积，mL； m——样品质量，g。 食品中农药及兽药残留的测定 二、畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量测定方法（高效液相色谱法） 1.原理 样品经提取，微孔滤膜过滤后直接进样，用反相色谱分离，紫外检测器检测，与标准比较定量，出峰顺序为土霉素、四环素、金霉素。标准加入法定量。 2.试剂 （1）乙腈（分析纯） （2）0.0lmol/L磷酸二氢钠溶液 称取1.56g（±0.0lg）磷酸二氢钠（NaH2pH4·2H2O）溶于蒸馏水中，定容到100mL，经微孔滤膜（0.45μm）过滤，备用。 (3)土霉素（OTC）标准溶液 称取土霉素0.0100g（±0.0001g），用0.1mol/L盐酸溶液每毫升含土霉素lmg。 食品中农药及兽药残留的测定 （4）四环素（TC）标准溶液 称取四环素0.0100g（±0.001g），用0.01mol/L盐酸溶液溶解并定容10.00mL，此溶液每毫升含四环素lmg。 （5）金霉素（CTC）标准溶液 称取金霉素0.0100g（±0.0001g），溶于蒸馏水并定容成10.00mL，此溶液每毫升含金霉素lmg。 以上标准品均按1000单位/mg折算。[2.（3）～2.（5）]溶液应于4℃以下保存，可使用1周。 （6）混合标准溶液 取[2.（3）、2.（4）]标准溶液各1.00mL，取[2.（5）]标准溶液2.00mL，置于10mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度。此溶液每毫升