食品卫生检测技术第07章.pptVIP

食品卫生细菌的检测技术 接种lmL样品的试管，注入已溶化并冷至50℃左右DC半固体培养基3mL。接种10mL样品的试管加入3倍DC培养基5mL，立即将样品与培养基充分混合。 （3）培养 待凝固后，置37℃温箱内培养18～24h，取出观察结果。 （三）结果判定 （1）培养基变橘红色，有气泡产生或琼脂崩裂，记录为“+ +”。 （2）培养基为橘红色，或有橘红色菌落无气泡和琼脂崩裂现象，记录为“+”。 （3）培养基为绿色，有黄色菌落无气泡和琼脂崩裂现象，记录为“土”。 （4）培养基为绿色，记录为“一”。 食品卫生细菌的检测技术 （四） 结果报告 1．根据结果判定为（1）、（4）反应结果，记录阳性管数，直接查表7-2“大肠菌群最可能数MPN检索表”，报告之。 2．如遇（2）、（3）反应结果，可挑2～3个可疑大肠菌群菌落，接种乳糖复发酵管，置37℃温箱培养18～24h，根据产酸产气管数，查表7-2 “大肠菌群最可能数MPN检索表”，报告之。 食品卫生细菌的检测技术 五、纸片快速检验法 （一）材料 1．培养基 成分 蛋白胨（优质胨） 1g 三号胆盐 0．1 乳糖 1．5g 磷酸钾K2HPO4·3H2O 0．4g 1.6％溴甲酚紫溶液 0．5mL 琼脂粉 0．1g 蒸馏水 100mL 4％TTC溶液 2．5mL 氯化钠 0．5g pH 7．0～7．2 食品卫生细菌的检测技术 制法 上述成分除溴甲酚紫和TTC外，其他成分加热溶解，冷却后调pH7.0～7.2，再按量加入溴甲酚紫溶液，混匀。 于116℃，灭菌15min，冷却至60℃左右，按量加入TTC溶液，混匀，即可浸渍纸片，然后用无菌镊子将纸片排放于消毒的大搪瓷盘内，放入40℃左右恒温室或37℃温箱烘干。将烘干的纸片经无菌操作装入消毒的塑料袋内，包装好放冰箱保存备用。 2．纸片制备和塑料袋 将新华中速定性滤纸，切成10cm～12cm，叠成5cm×6cm大小的双层纸片，经干烤或高压灭菌（高压后于37℃恒温箱烘干）后备用。 塑料袋为耐高温的聚丙塑料薄膜袋。按实验要求压合成一定规格的袋，于116℃，经15min灭菌后备用。 食品卫生细菌的检测技术 （二）检验方法 1．样品处理 液体样品按国标方法进行；固体样品，取25g样品，研碎加25mL灭菌盐水混匀。 2．接种 液体样品吸取3个lmL分别涂布于3张纸片，再吸取1∶10和l∶100稀释液各3个lmL，分别涂布于3张纸片；固体样品，吸取1:1混悬液3个lmL分别涂布于3张纸片，再吸取1∶10和1∶100稀释液各3个lmL，分别涂布于3张纸片，而后用手轻轻压平，置（36土1）℃恒温箱，培养15h观察结果。 食品卫生细菌的检测技术 （三）结果判定 （1）纸片上出现紫红色菌落，其周围有黄圈者为阳性。 （2）纸片为一种颜色，无菌落生长者为阴性。 （3）纸片呈紫色，有紫红色菌落，其周围无黄圈者为阴性。 （4）酸性食品接种后，纸片变黄，经培养后无紫红色菌落为阴性。 （5）纸片变色呈现不典型菌落，结果可疑者应做复发酵进行验证。 （四）结果报告 根据纸片的阳性片数，查表7-2“大肠菌群最可能数MPN检索表”，报告之。? 食品卫生细菌的检测技术 7.革兰氏染色液 （1）结晶紫染色液 成分： 结晶紫1g、95%乙醇20mL、1%草酸铵水溶液80mL。 制法： 将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。 （2）革兰氏碘液 成分： 碘1g、碘化钾2g、蒸馏水300mL。 制法： 将碘与碘化钾进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300 mL。 （3）沙黄复染液 成分： 沙黄0.25g、95%乙醇10mL、蒸馏水90mL。 制法： 将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸