食品卫生检测技术第08章.pptVIP

食品中致病菌的检测技术 4．初步鉴定 将可疑菌落做氧化酶和过氧化氢酶试验，如为阳性，则涂片做革兰氏染色。本菌为革兰氏阴性菌，大小为0.3～0.4μm×1.5～3μm，呈S型、螺旋状或纺锤形。在固体培养基上培养时间过久或在不适条件下则常呈现球形菌。在暗视野或相差显微镜下观察，动力明显。根据菌落生长特性、菌体染色、动力、氧化酶和过氧化酶试验阳性者，可初步确定为弯曲菌。 食品中致病菌的检测技术 5．确定试验 经初步鉴定后，仍需做下述试验（以下各项试验均需在5%氧气的微需氧环境中培养）。 （1）甘氨酸耐受性试验 接种于甘氨酸培养基中，培养48h，如为阳性，在培养基近表面有云雾状生长，则为弯曲菌空肠亚种。 （2）硫化氢生长试验 接种于三糖铁斜面上，并吊一根乙酸铅滤纸条于管口，培养物经48～72h培养，空肠弯曲菌一般在斜面上少量生长，其反应为碱性/碱性，滤纸条变黑，但培养基底部不因硫化氢而变黑。 食品中致病菌的检测技术 （3）对3.5%氯化钠的耐受性试验 接种于3.5%含盐肉汤培养基，经48h培养，空肠弯曲菌不生长。 （4）42℃和25℃生长试验 将培养物接种于两管布氏肉汤中，一管放于42℃，一管放于25℃培养48h，42℃生长而25℃不生长者，则为空肠弯曲菌。 （5）马尿酸钠水解试验 将培养物接种于马尿酸钠培养基，于42℃培养48h，离心沉淀取出部分上清液。加入三氯化铁试剂，如出现恒久沉淀物则为阳性，空肠弯曲菌呈阳性反应。 （6）萘啶酸试验 将可疑空肠弯曲菌涂布接种于血平板上，然后贴上含30μg萘啶酸的滤纸于平板上，空肠弯曲菌敏感而肠道弯曲菌不敏感。 食品中致病菌的检测技术 （7）TTC（2,3,5-氯化三苯四氮唑）试验 空肠弯曲菌在TTC培养基上呈阳性，而胎儿弯曲菌为阴性，阳性者有紫色菌苔并有光泽。 （8）硝酸盐还原试验 取培养物的浓菌悬液，在37℃放置2h，加入试剂，观察颜色反应，空肠弯曲菌呈红色的阳性反应。 （9）鉴别试验 弯曲菌的生化鉴别见表8-12。 食品中致病菌的检测技术 6．生物分型 （1）快速马尿酸钠水解试验 将细菌接种在1%马尿酸钠0.4mL，37℃水浴2h，再加丙酮与丁醇溶解的3.5%茚三酮0.2mL，徐徐加入避免相混，放置l0min后观察结果。深紫色为阳性，淡紫色或无色为阴性。 （2）快速硫化氢（H2S）试验 取一大环细菌悬浮于快速硫化氢半固体琼脂上三分之一段，37℃水浴2h，观察结果，细菌团块周围变黑为阳性。 （3）DNA酶水解试验 细菌点种于DNA酶甲基绿琼脂平板上，微需氧环境培养3～5 d，菌苔周围出现无色透明环为阳性。 食品中致病菌的检测技术 生物分型结果见表8-13。 7．血清分型 空肠弯曲菌O因子分型应采用间接血凝法，H或K因子分型可用玻片凝集法。 8．菌种保存 空肠弯曲菌菌种的保存，应接种在改良Camp-BAP斜面培养基上（棉塞不宜过紧），于42～43℃微需氧中培养48h后，置4℃冰箱微需氧内可保存10～l4d，需要时仍可转种一次，长期保存用冻干法。 9．注意事项 对空肠弯曲菌检验时，应严格执行无菌操作，防止自身感染。 食品中致病菌的检测技术 四、变形杆菌的检验 （一）概述 变形杆菌的主要生化学性状见表8-14。 食品中致病菌的检测技术 为证实从不同样品中分离的变形杆菌是否为同一菌型时，最好是用血清学的方法进行分型，但在没有因子血清的情况下，也可采用以下几种方法进行试验。 1．凝集试验 用两株菌的免疫血清与两株细菌作交叉凝集试验，测定交叉凝集效价，观察两菌是否相同。 2．吸收试验 用两株菌的免疫血清与两株细菌做相互交叉吸收试验，观察是否能将血清中的凝集素完全吸除，确定两株细菌的抗原是否相同。 3．拮抗试验 将两株不同来源分离的菌株点种在普通琼脂平板或血琼脂平板上，经37℃、24h后观察结果，在两株细菌菌落交界处出现明显的分界线时，为菌株不同出现拮抗现象（即称为Dienes现象）。如果菌株相同时，菌株之间无拮抗现象产生，两株细菌的菌落可以融合在一起。但应注意也有少数例外。 食品中致病菌的检测技术 （二）检测方法 1．取被检样品25g，加225mL灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种在SS琼脂平板和EMB琼脂平板上，经37C、培养18～24h，普通变形杆菌和奇异变形杆菌在弱选择性的固体培养基上可出现菌落蔓延生长的特点，SS琼脂能抑制其蔓延生长，呈单个菌落。其他变形杆菌呈半透明圆形菌落。 2．挑取上述可疑菌落，接种三糖铁斜面培养基，经37℃、24h培养后，斜面产碱不变，底层产酸