同时提取土壤微生物DNA和RNA方法的研究.pdfVIP

第34卷 第6期 I墨砣对 -a求 Vo1．34 No6 2011年 6月 Environm entalScience Technology Jun． 2011 洪桂云，鲍立宁，魏兆军．同时提取土壤微生物DNA和RNA方法的研究lJ1．环境科学与技术，2011，34(6)：24—27．Hoa·gGui—yun，BaoLi—ning，WeiZhat-jJn SimultaneousrecoveryofDNAandRNAfromsoilmicrobe[J]．EnvironmentalScience＆Technology，2011．34(6)：24—27． 同时提取土壤微生物DNA和RNA方法的研究 洪桂云 ， 鲍立宁 ， 魏兆军 (1．安徽建筑工业学院环境工程系，安徽 合肥 230022； 2．合肥上 大学生物与食品学院，安徽 合肥 230039) 摘 要：获得高浓度 、大片段、多样性程度高的士壤微生物总DNA足研究土壤做生物群落结构的分了生态学摹础。研究采用PBS缓冲 液洗涤土壤样品，结合SDS裂解微生物细胞的方法，同时提取分别添加小麦秸秆粉和油菜千占秆粉的 种土壤样品的微生物DNA和RNA。 对提取出的DNA和RNA进行酶切，媾因组PCR和反转录PCR， 验绵 表明陔法提取的核酸不需要进一步处理，其纯度可以满足后续的 分子生物学试验的研究，同时避免九扫于纯化导致的核酸量的降低。为研究土壤微牛物多样性和土壤微生物的活性及在土壤环境中的功能 等方面的研究奠定r基础 关键词：PBS洗涤土壤； 同时提取DNA和RNA； 酶切； 16SrDNAPCR； 16SrRNA反转录PCR 中图分类号：X172 文献标志码：A doi： 3969j／．issn．1003—6504．2011．06．006 文章编号：1003—6504(2011)06—0024—04 SimultaneousRecoveryofDNA andRNA from SoilM icrobe HONGGui—yun， BAOLi—ning， WEIZhao-jun (1．DepartmentofEnvironmentalEngineering，AnhuiUniversityofArchitecture，Hcfei230022，China 2．SchoolofBiotechnology．HereiUniversityofTechnology．Hefei230039．China) Abstract：IsolationofDNA from highpurity，largefragmentanddiversityofsoilmicrobeisthebasisofrmolecularecology studyoncommunity structure．PBS washingprocedureandSDSextraction method werechosen toextractDNA and RNA rfom twotypesofsoilssimultaneously．Enzymedigesting，PCR and RT~PCR ofrtheextracted DNA orRNA ，and results showed thatpurity ofnucleic acid wassuitable forfollow —up pI’ocedures，which would provide basisforstudying of microbia1activitiesandfulnction insoilenvironment． Key words：PBS washing procedure； simultaneousrecovery ofDNA and RNA ；enzyme digesting； 16S rDNA PCR； 】6SrRNA RT—PCR 近年来，分子生物学手段已经广泛应用于研究上 和纯化，探讨了通过该