凝血酶分离纯化方法的研究进展.pdfVIP

维普资讯 食《品研究与开发2004年 12月第25卷第6期 65 凝血酶分离纯化方法的研究进展 宋宏新 马永征 李敏康 陕西科技大学生命科学与工程学院 咸阳 712081 摘 要：血浆中凝血酶是近年开发的一种新型止血剂。对其分离纯化的等电点沉淀法、柠檬酸钡吸附法和氢氧化镁吸 附法做 了综述 。 关键词：猪凝血酶，等电点沉淀法，柠檬酸钡吸附法；氢氧化镁吸附法，综述 A REVIEW OF PURIFICAIIJON MEllHODS ON PORCINE THR0MBIN SONG Hongxin MA YongzhengLIMinkang CollegeofLifeScienceandEngineering,ShaanxiUniversityofScience Technology，Xinaynag，712081 Abstract：Thrombin in blood is anew haemostatic which isexploited in recentyears．Adsorption methodwithbarium citrate，adsoprtionmethodwithMg(OH)2andprecipitatingatisoelectricpoint areused to purifythrombin are allsummarized in thispaper． Key words：porcine thrombin；precipitating at isoelectricpoint；adsoprtion method with barium citrate；adsoprtionmethodwithMg(OH)2；review 凝血酶 (Thombin，EC3．4．21．5)是在血液凝 固系 少量的凝血因子 XIII沉淀出现。这样先有效除去了 统中起重要作有的丝氨酸蛋白水解酶，是凝血酶 血浆中的纤维蛋 白原和部分杂蛋 白，消除了其对后 原经凝血酶原激活物激活而成，具有较高的专一 续纯化工作的影响。冷冻处理同时破坏了血浆中脂 性 ，是近年来国内开发的一种新型速效局部止血 质一蛋 白质的稳定乳化体系，更利于蛋 白质的提取 药，临床上广泛应用于消化道出血和外科手术止 和分离_5J。 血。高纯度的凝血酶在基因工程后序加工处理中 2 凝血酶原的提取 具有特殊作用[1]。凝血酶止血机理是促使血液中的 血浆中既有凝血酶原、凝血酶的底物——纤维 纤维蛋白原转化为纤维蛋 白，同时促使血小板聚 蛋 白原，还有参与血液凝 固的其他的一些凝血因子 集，加速血液凝固，达到迅速止血的目的。国外凝 等杂蛋白。凝血酶原的提取实际上是去除纤维蛋白 血酶的临床应用较早。1939年 Seegers等从血清 原和一些不参与血液凝固的杂蛋 白，同时保留凝血 中分离凝血酶成功，用于肝脏实质性出血和骨髓 因子，有利于凝血酶原的激活。目前凝血酶原的制 出血止血取得显著效果。自上世纪80年代末，国 备方法主要有柠檬酸钡吸附法、氢氧化镁吸附法和 内厂家相继开发成功，并广泛应用于临床各科[。 等电点沉淀法3种。 制备凝血酶的原料多为牛、猪和人的血浆。另外 ， 2．1 等电点沉淀法 还有从鸵鸟[]和鲑鱼[]的血液分离凝血酶的报道。 凝血酶的等电点在 5．0～5．5。利用蛋 白质在等 凝血酶分离纯化过程包括血浆的预处理、凝血酶 电点的pH条件下，溶解度最低的性质，可以对其 原的提取、凝血酶原的激活和粗凝血酶的获得及 分离。血浆必须经过稀释后才能用于凝血酶原的制 凝血酶的纯化。 备。稀释度对酶活有一定的影响。据施大林等的报 1 血浆的预处理