不同细胞刺激剂对小鼠调适性t 细胞功能活化的影响.pdfVIP

维普资讯 · 142 · 主星鱼重病急救医学ZOO7年3月第 19卷第3期 ChinCritCareMeal，MarchZ007，VoI．19，No．3 · 论 著 · 不同细胞刺激剂对小鼠调节性T细胞功能活化的影响 张莹 姚咏明 常青 董宁 【摘要】 目的 研究体外实验 中不 同细胞刺激剂对小鼠调节性 T细胞(Treg)表面 T淋 巴细胞毒性相关 抗原一4(CTLA一4)及叉头翼状螺旋转录 因子 (Foxp3)表达的影响，并对不同细胞刺激剂在Treg抑制活性发 挥中的作用进行 比较 。方法 免疫磁珠法分离健康清洁级 BALB／c小 鼠脾脏CD4CD25Treg。采用植物凝 集素(PHA，20mg／L)、刀豆蛋 白A(ConA。5g／L)及固相包被抗 CD3(1mg／L)刺激Treg，观察刺激后 24、48 和 72hCTLA一4及 Foxp3表达 的时间一效应关系。结果 PHA刺激对小 鼠Treg细胞表面 CTLA一4及 Foxp3表达均无显著影响 (P均0．05)；而ConA表现 出一过性的Treg活化作用 ，24hCTLA一4表达明显 上调 (PO．01)，但随刺激时间延长作用减弱，48h和72h后其表达 已接近未刺激前的范围，同时ConA未能 明显诱导 Foxp3表达 (P0．05)；抗 CD3可有效刺激 Treg活化 ，在 24、48和 72hCTLA一4及Foxp3表达均 明显上调(P0．05或 P0．01)，其 中以作用 24h和 48h表达上调尤为显著 (P均d0．01)。结论 抗 CD3 在体外实验 中能明显刺激 Treg活化并诱导其抑制性相关分子 CTLA一4及 Foxp3的表达 ，为进一步探讨 CD4CD25Treg的免疫调节效应提供了可能。 【关键词】 调节性T细胞； T淋巴细胞毒性相关抗原4； 叉头翼状螺旋转录因子； 抗 CD3 Influenceof differentcyto— stimulion immunologicalactivity of splenic regulatory T cells in mice ZHANG Ying ，YAO Yong—uring，CHANG Qing，DONG Ning． DepartmentofC．ynaecology and Obstetrics．SouthwestHospita1．theThirdM ilitaryM edicalUniversity，Chongqing 400038,China Corresponding author：YAO Yong—uring (Email：c if@sina．corn) — [Abstract] Objective ToinvestigatetheexpressionofcytotoxicT lymphocyte—associatedantigen4 (CTLA一4)andintranuclearforkhead／wingedhelixtranscriptionfactorp3(Foxp3)ofsplenicregulatoryT cells (Tregs)inmice，andcomparetheeffectsofdifferentstimulion theimmunologicalactivityofTregs． Methods CD4 CD25 Tregsisolatedfrom thespleensofmaleBALB／cmicebymagneticbeadswereseeded on96一well(1×10 cells／wel1)cellcultureplatessupplementedwithphytohemagglutin (PHA，20mg／L)， concanavalinA (ConA．5g／L)orcoatedwithanti—CD3(1mg／L)．Afterbeingstimulatedwithdifferent stimuliforvariouslength oftime，the expressionsofCTLA 一4 and Foxp3 molecules of Tregswere determined．Thetime—dependentresponsesbetweendifferentstimuliandCTLA 一4aswellasFoxp3were analyzedbymeansofflow cytomet