酶制剂酶的活力测定94课件.ppt

LOGO主讲人：王永刚酶的活力测定酶制剂主要内容：酶的活力测定。在酶的生产及应用过程中，经常要进行酶的活力测定，以确定酶量的多少及变化情况，酶活力是指在一定条件下，酶所催化的反应速度，反应速度越大，表明酶活力越高。一、酶的活力测定国际生化联合会规定，在特定条件下（25℃，或其他选用的温度，pH等条件均采用最适条件），每1分钟催化1umol底物转化为产物的酶量，定义为1个活力单位，这个单位称为酶的国际单位（IU）。如糖化酶活力测定时，在ph4.6温度为40℃的条件下，每一分钟催化可溶性淀粉水解生成1umol葡萄糖的酶量，定义为一个活力单位。为了比较酶制剂纯度和活力的高低，常常采用比活力这一概念，酶的比活力指在特定条件下，每1mg酶蛋白所具有的酶活力。酶的比活力酶的比活力=酶活力（单位）/mg酶蛋白酶活力测定方法多种多样，总的要求是快速简便，准确。酶活力测定一般采用如下步骤：（1）根据酶的专一性，选择适宜的底物，并配制成一定浓度的底物溶液.要求所使用的底物均匀一致，达到一定的纯度。（2）确定酶促反应的温度，pH等条件，温度可选在室温25℃，酶反应最适温度，最适ph值，反应条件一经确定，在反应过程中尽量保持恒定不变。（3）在一定条件下，将一定量的酶液与底物混合溶液混，混合均匀，适时记下反应开始的时间。（4）反应达到一定时间，取出适量反应液，运用各种生化检测技术，测定产物的生产量或底物的减少量，为了准确的反应酶促反应的结果，应尽量采用快速，简便的方法，立即测出结果，若不能立即测出结果的，要及时终止反应，然后再测定。LOGO