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2.培养器皿和设备;细胞培养室的设备;;;二、水质;;三、pH
;;开始培养时培养液的理想pH为7.4,随着培养的进行,pH会因细胞代谢所释放的CO2和乳酸而下降,但必须控制在7.0以上。
大规模培养时,影响培养液的pH稳定性的主要因素有三种:缓冲液的缓冲能力及种类;对流空间大小;葡萄糖浓度。
磷酸对动物细胞有毒害作用,常用的缓冲系统是NaHCO3/CO2。碳酸氢钠:缓冲能力差、毒性小、成本低,有营养作用,应用较多
调节培养液pH的方法:
A、添加NaHCO3缓冲剂及通入含CO2的空气进行调节;
B、用0.1mol/LNaOH或0.1mol/LHCl进行调节。
利用酸碱直接调节会发生局部过酸或过碱的现象,从而对细胞产生毒害作用。
;四、渗透压
;五、温度的培养条件;维持培养细胞旺盛生长,必须有恒定适宜的温度。人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃,偏离这一温度范围,细胞的正常代谢会受到影响,甚至死亡。
培养细胞对低温的耐受力较对高温强,温度上升不超过39℃时,细胞代谢与温度成正比;
人体细胞在39-40℃1小时,即能受到一定损伤,但仍有可能恢复;
在40-41℃1小时,细胞会普遍受到损伤,仅小半数有可能恢复;
41-42℃1小时,细胞受到严重损伤,大部分细胞死亡,个别细胞仍有恢复可能;
当温度在43℃以上1小时,细胞全部死亡。低温下会使细胞代谢速率降低
;六、气体;六、气体
一般细胞在培养初期要求较低的溶氧水平,而在对数生长期或培养后期,对溶氧水平要求增加,如果供氧不足,将导致细胞缺氧而死亡,过高的氧对细胞生长也会产生不利的影响,超过60%时甚至是有毒的,抑制细胞的生长和增殖。除了氧气供应外,还应注意培养基的氧气和CO2的平衡,开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中.
二氧化碳既是细胞代谢产物,也是细胞生长繁殖所需成分,它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值。
生产中常采用不同比例的O2,N2,CO2和空气,根据需要加以使用。
;七、无毒、无污染
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