动物细胞培养材料准备生物制药技术专业教学36课件.pptx

;;生产车间实践;;;二、动物细胞的培养条件和培养基;器材的清洗和消毒

水质

pH：动物细胞培养的最适pH为7.2-7.4，低于6.8或高于7.6时会对细胞产生不利影响，严重时可引起细胞退变甚至死亡;;天然培养基：细胞培养早期阶段多采用这类培养基，如血浆凝块、血清、淋巴液、胚胎浸液、羊水、腹水等

缺点：成分复杂，组分不稳定，来源有限，不适于大量培养和生产的需要;l950年Morgan等配制成了第一个合成培养基-199培养基。现有BME、MEM、DMEM、HAMF12、RPMI1640、ISOCOV、199和McCoy5A等

成分：氨基酸、维生素、糖类、无机盐、其他成分（小牛血清或胎牛血清）

优点：成分明确，组分稳定，可大量生产;提供有利于细胞生长增殖所需的各种生长因子和激素

提供有利于细胞贴壁所需的贴附因子和伸展因子

提供识别金属、激素、维生素和脂质的结合蛋白

提供细胞生长所必需的脂肪酸和微量元素

提供良好的pH缓冲系统;提高了细胞培养的可重复性，避免了由于血清批次之间差异的影响

减少了由血清带来病毒、真菌和支原体等微生物污染的危险

供应充足、稳定

细胞产品易于纯化

避免了血清中某些因素对有些细胞的毒性

减少了血清中蛋白对某些生物测定的干扰，便于对实验结果的分析;;三、动物细胞的生产特性;四、动物细胞培养的影响因素;;;五、大规模动物细胞培养方法;1.悬浮培养;2.贴壁培养;3.贴壁-悬浮培养（假悬浮培养）;广泛应用于生产疫苗、基因工程产品等。微载体培养是目前公认的最有发展前途的一种动物细胞大规模培养技术，其兼具悬浮培养和贴壁培养的优点，放大容易。;微载体培养的优点：既可创造相当大的贴附面积供细胞贴附生长增殖，满足绝大多数细胞的基本要求，又由于载体体积很小，比重较轻，在轻度搅拌下即可携带细胞自由地悬浮在培养基内，充分发挥了悬浮培养的一切优点;;小结：培养成功必备条件;;;

实验室型细胞反应器;1.动物细胞悬浮培养反应器;1.动物细胞悬浮培养反应器;;;;2.动物细胞贴壁培养搅拌器;滚瓶系统;;;中空纤维管式反应器;中空纤维反应器;;;六.植物细胞培养和反应器;植物细胞培养的特点：

1．生产速率慢；

2．有坚固的细胞壁???代谢产物不分泌到胞外而留在细胞内，因此要得到大量次级代谢产物，必须进行高密度培养。;因此，利用植物细胞培养生产的物质，一般仅仅限于那些难于化学合成，无法用微生物合成和附加值很高的物质。

大多数植物细胞可采用间歇式反应器来进行培养。摇瓶、通用式发酵罐、鼓泡式、气升式和旋转圆筒式的生物反应器都可用于植物细胞培养。植物细胞培养反应器已从实验规模的1~20L放大到工业性试验规模的130~20000L。

?注意:植物细胞培养时搅拌液体的剪切力比微生物能耐受的低很多

;一、细菌污染

细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细

胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量)，也可能

因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌。

培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改

变。也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下

发现菌体才知污染。所以，每天应仔细观察。污染后

细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆

脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。;二、真菌污染

真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在霉雨季节

进行细胞培养更易污染。最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔

子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。

培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的

小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下

可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基

中，有的呈链状排列。念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边

和细胞之间。个体细小，有增多趋势。镜下看时，要将培养瓶

用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相

混淆。真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒

性作用而使细胞脱落死亡。

;三、支原体污染

支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微

生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除

它，光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发

现，能在偏碱条件(pH7.6～8.0)下生存，对青霉素

有抗药性。多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。

电镜下可见其有三层结构，无细胞壁，中央有电子

密度大的密集颗粒或丝状的中心囊。

培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生

长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。但多数细

胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，

还会产生交叉污染。;四、病毒污染

采用组织细胞培养法生产疫苗，如果没有除去潜在

病毒的组织培养物，会产生病毒污染。目前，从原

代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。

尽管病毒污染的细胞