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无菌检查法

基本概念：无菌检查法系用于检查《中国药典》要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。检查对象各类注射剂、吸入粉雾剂、眼用制剂、可吸收的止血剂、用于手术、烧伤及严重创伤的局部给药制剂等。无菌检查法

一、无菌检查的人员与环境无菌检查的人员：具备微生物专业知识，并经无菌技术培训。无菌检查环境：环境洁净度为B级背景下的A级单向流洁净区域或隔离系统。无菌检查要求：全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。日常检验还需对试验环境进行监控。无菌检查法

1.培养基的种类及制备无菌检查用培养基主要有硫乙醇酸盐流体培养基（用于培养好氧菌、厌氧菌）、胰酪大豆胨液体培养基（真菌、需氧菌培养基）。其制备的处方、方法按《中国药典》规定执行。2.制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境。培养基若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。3.培养基的适用性检查无论是市售的脱水培养基或配制的培养基，其无菌性检查及灵敏度检查应符合药典规定。二、培养基的制备与检查无菌检查法

三、稀释液、冲洗液及其制备常用的稀释液、冲洗液：0.1%蛋白胨水溶液、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲溶液，其制备方法按《中国药典》规定执行。稀释液、冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中合剂等。四、方法验证（略）无菌检查法

五、供试品的无菌检查1．检验数量检验数量是指一次试验所用供试品最小包装容器的数量。批出厂产品最少检验数量按表5-8规定；供试品的最少检验量按表5-9规定。表中最少检验数量不包括阳性对照试验的供试品用量。一般情况下，供试品无菌检查若采用薄膜滤过法，应增加1/2的最小检验数量作为阳性对照用；若采用直接接种法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。无菌检查法

五、供试品的无菌检查供试品批产量N（个）接种每种培养基最少检验数量注射剂≤10010%或4个（取较多者）100＜N≤50010个＞5002%或20个（取较多者）大体积注射剂（＞100ml）2%或10个（取较少者）眼用及其他非注射产品≤2005%或2个（取较多者）＞20010个桶装固体原料≤4每个容器4＜N≤5020%或4个容器（取较多者）＞502%或10个容器（取较多者）表5-8批出厂产品最少检验数量无菌检查法

五、供试品的无菌检查供试品每支样品接入每管最少检验数量每支供试品接人每种培养基的最少量液体制剂V≤1ml全量1ml＜V≤40ml半量，但不得少于1ml40ml＜V≤100ml20mlV＞100ml10%，但不得少于20ml固体制剂M＜50mg全量50mg≤M＜300mg半量300mg≤M＜5g150mgM≥5g500mg表5-9供试品的最少检验量无菌检查法

五、供试品的无菌检查2检验量指一次试验所用的供试品总量（g或ml）。每份培养基接种的供试品量按表5-8、表5-9规定。若每支（瓶）供试品的装量按规定足够接种两份培养基，则应分别接种硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基。采用薄膜滤过法时，检验量应不少于直接接种法的供试品总接种量，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物滤过。无菌检查法

五、供试品的无菌检查3．阳性对照应根据供试品特性选择阳性对照菌，选择方法可以见下表。阳性对照试验的菌液制备同方法验证试验，加菌量小于100cfu，供试品用量同无菌检查每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养48～72小时应生长良好。不同特性的供试品阳性对照菌无抑菌作用及抗革兰氏阳性菌为主金黄色葡萄球菌抗革兰氏阴性菌为主大肠埃希菌抗厌氧菌的供试品生孢梭菌抗真菌的供试品白色念珠菌无菌检查法

五、供试品的无菌检查4．阴性对照供试品无菌检查时，应取相应溶剂和稀释剂，冲洗液同法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。中国药典的“无菌检查法”有直接接种法和薄膜滤过法两种。只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤法。进行供试品无菌检查时，所采用的检查方法和检验条件应与验证的方法相同。无菌检查法

五、供试品的无菌检查5．供试品处理及接种培养基：薄膜过滤法和直接接种法集菌仪封闭式薄膜过滤法操作无菌检查法

5．供试品处理及接种培养基：薄膜过滤法和直接接种法开放式薄膜过滤法操作无菌检查法

五、供试品的无菌检查5．供试品处理及接种培养基：薄膜过滤法和直接接