免疫学技术在科研中的应用--课件.pptxVIP

免疫新技术在科研中的应用 ppt课件 1 w 抗原抗体反应的特点 w 抗原抗体反应的影响因素 w 常用的抗原抗体反应 抗原或抗体的检测 ppt课件 2 上课 啦 ! ! w 你怎么称呼老师？ w 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？ w 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ w 教师的教鞭 w “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨， 没有学问无颜见爹娘 … …” w “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早 … …” 4 w 高度的特异性 w 可逆性 • 抗原抗体结合除了空间构象互补外，主要以 氢键、静电引力、范德华力和疏水键等分子 表面的化学基团之间的非共价方式结合。这 种非共价键不如共价键结合稳定，极易受温 度、酸碱度和离子强度的影响而解离。 w 抗原抗体比例影响免疫复合物的大小 w 抗原抗体反应的两pp个t课件阶段 5 抗原抗体反应的特点 w 抗原抗体浓度与比例 w 电解质 • 抗原抗体特异性结合后，亲水性降低，易受电解质的 影响而使表面失去较多的负电荷。 w 温度 • 适当的温度可增加抗原与抗体分子的碰撞机会，加 速抗原抗体复合物的形成。 w 酸碱度 • 抗原抗体反应的最适pH在6—8之间， pH过高或过低， 即过碱或过酸，均可影响抗原、抗体的理化性质。 ppt课件 6 抗原抗体反应的影响因素 w 凝集反应 w 沉淀反应 w 免疫标记技术 常用的抗原抗体反应 ppt课件 7 w 直接凝集反应 • 血型鉴定 • 肥大反应 w 间接凝集反应 w 间接凝集抑制试验 w 微粒捕获酶免疫分析技术 凝集反应 ppt课件 8 间接凝集反应 w 将可溶性抗原或抗体吸附在与免疫无关 的颗粒载体上，形成致敏颗粒，再与相 应抗体或抗原进行反应产生的凝集反应， 称为间接凝集反应。 w 颗粒载体有红细胞、聚苯乙烯乳胶颗粒、 活性炭颗粒，而相应的凝集现象分别称 为间接血球凝集、间接乳胶凝集、间接 炭粒凝集反应。 ppt课件 9 可溶性抗原 载体 致敏载体 抗体 凝集 图27-1 间接凝集反应 00 00 ppt课件 10 w 将已知特异性抗体致敏的免疫微粒与生 物素—亲和素—酶放大系统相结合，最 后酶作用于荧光底物，使之发荧光，通 过检测荧光强度判断待测抗原的含量。 w 检测肿瘤标记物CAl99、CEA、CAl25、 AFP、性激素、甲状腺素T-T+、叶酸、 HIV抗体、 HCG等微量可溶性抗原。 微粒捕获酶免疫分析技术 ppt课件 11 生物素 亲和素 酶(ALP) 图27-2 微粒捕获酶免疫分析 pp 床 作 12 AFP 抗AFP 微粒 生物素化抗AFP E w 速率散射比浊法／免疫比浊法 w 琼脂扩散法 • 单向琼脂扩散 • 双向琼脂扩散 • 火箭电泳 • 对流免疫电泳 • 免疫印迹技术 沉淀反应 ppt课件 13 速率散射比浊法／免疫比浊法 w 将已知抗体与相应抗原在液相中按一定比例混合形成 可溶性免疫复合物，这些复合物微小粒子对一定波长 的光照射发生散射，可通过三个光路系统测定光散射 (OD值)。 w 抗体含量固定并处于抗体过剩时，免疫复合物的多少 直接取决于抗原的浓度，抗原的终浓度通过标准品绘 出的标准曲线查出。 w 提高了灵敏度，通过自动化，可同时检测多个样品并 进行精确的定量分析。 w 检测前白蛋白、酸性蛋白酶、巨球蛋白、转铁蛋白、 尿微量蛋白及IgG、IgM、IgA及补体，药物含量分析。 ppt课件 14 Agi 与 Ag₂ 完 全 相 同 沉 淀 线 完 全 融 合 Ag₃ 与 Ag₄ 部 分 相 同 沉 淀 线 部 分 融 合 Ag₂ 与 Ag₃ 完 全 不 同 沉 淀 线 互 不 融 合 15 27-3 多 种 抗 原 抗 体 沉 淀 反 应 图27-4 火箭电泳 w 将用SDS— 聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE分 离得到的按分子量大小排列的非标记蛋 白转移到固相载体膜上，再用标记的特 异性的抗血清或单克隆抗体对蛋白质进 行定性及定量分析的技术，其鉴定蛋白 质的敏感性为1—5ng。 w